豬輪狀病毒a組（prv-a）核酸檢測試劑盒組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 u/l，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 u/l，100 u/l，50 u/l，25 u/l，12.5 u/l，6.25 u/l，3.12 u/l，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 u/l。如配制100 u/l標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 u/l的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液a：1×10ml。
5、 檢測稀釋液b：1×10ml。
使用及效果：
pcr反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
pcr反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板dna特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③taq dna聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及taq dna聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
pcr產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，pcr的靈敏度可達(dá)3個rfu(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
pcr反應(yīng)用耐高溫的taq dna聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在dna擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，dna 粗制品及總rna均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活pcr技術(shù)概論。