胰島移植長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是治療ⅰ型糖尿病的一種頗具吸引力的療法，并具有相當(dāng)?shù)膬?yōu)勢(shì)。為了研究胰島移植中tacrolimus,rapamycin和antiil-2antibody在嚙齒類動(dòng)物之間防止排斥反應(yīng)的機(jī)理和現(xiàn)象，本課題選用wistar大鼠為胰島移植物的供體，c57bl/6(b6)作為移植受體，移植物經(jīng)分離和純化后被移植入受體大鼠的腎包膜下，為了更好的模擬臨床胰島移植的效果，根據(jù)edmontonprotocol方案進(jìn)行用藥。
大鼠被隨機(jī)的分為5組，依次是：control組，tacrolimus+rapamycin組，tacrolimus+antiil-2antibody組，rapamycin+antiil-2antibody組，tacrolimus+rapamycin+antiil-2antibody組.
實(shí)驗(yàn)方法：供體胰島分離和純化采用wistar大鼠進(jìn)行，胰腺組織經(jīng)膠原酶p消化，通過ficoll梯度離心分離純化之后，在37℃(98.6°f)，5％的二氧化碳溫箱中孵育不超過2小時(shí)，將分離純化后的胰島細(xì)胞移植入c57bl/6(b6)受者大鼠腎包膜下，每只大鼠移植300-400個(gè)胰島為宜。移植后每周三次對(duì)各組大鼠應(yīng)用*進(jìn)行尾靜脈采血，測(cè)量血糖，每周三次，連續(xù)100天受體血糖水平不超過18mmol/l，即為長(zhǎng)期存活。組織學(xué)檢查：于胰島細(xì)胞移植第10天和第105天大鼠腎臟做病理切片，10％甲醛包埋，石蠟包埋，蘇木精-伊紅染色，鏡下觀察組織學(xué)變化。糖耐量試驗(yàn)：術(shù)后兩周，進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)，所有受體b6大鼠均給予20％葡萄糖(1g/kg體重)腹腔內(nèi)注射，于注射前和注射后30，60，90，120min測(cè)定血糖，并與對(duì)照組糖尿病大鼠做統(tǒng)計(jì)學(xué)兩兩比較。外周血cd4+，cd4+t細(xì)胞亞群及il-2含量試驗(yàn)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果：應(yīng)用不同免疫抑制劑方案后，移植受體存活時(shí)間比較應(yīng)用不同免疫抑制劑方案后，移植受體平均存活時(shí)間如下表，一般認(rèn)為移植物存活時(shí)間超過100天即為長(zhǎng)期存活?？梢钥闯鰬?yīng)用tacrolumus+rapamycin的組，存活時(shí)間約為140天左右，85.7％的大鼠存活時(shí)間超過100天，明顯高于對(duì)照組(p=0.000)，具有顯著性差異(表6-1)；應(yīng)用tacrolumus+rapamycin+antiil-2antibody的組(n=7)，移植受體存活時(shí)間平均約為161天左右，其中28.5％的大鼠存活時(shí)間超過200天，一只為109天，五只大鼠存活時(shí)間超過150天，兩只超過200天，與對(duì)照組相比，(p＜0.001)，具有顯著性差異。各組腹腔內(nèi)注射葡萄糖后，對(duì)照組血糖濃度明顯高于其他四組，60分鐘以后，對(duì)照組血糖水平下降緩慢，直到120分鐘仍然維持高血糖狀態(tài)，恢復(fù)緩慢，另外四組中t+a+r聯(lián)合用藥組血糖zui終恢復(fù)到糖耐量試驗(yàn)前的水平，與對(duì)照組相比，有顯著性差異，(p＜0.001)。
結(jié)論：根據(jù)edmontonprotocol，選擇性的應(yīng)用tacrolimus，rapamycin，anti-interleukin-2antibody三種藥物，防治移植術(shù)后機(jī)體免疫系統(tǒng)的排斥反應(yīng)，均不同程度的延長(zhǎng)了移植物的存活時(shí)間，其中以三種藥物聯(lián)合應(yīng)用，移植物存活時(shí)間zui長(zhǎng)。免疫抑制劑能夠明顯提高大鼠胰島細(xì)胞移植的長(zhǎng)期存活率，延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間，與對(duì)移植免疫排斥反應(yīng)的抑制作用，并用各種相關(guān)指標(biāo)顯示出來。