ace色譜柱超惰性固定相對生物分子反相hplc的益處
增加ph范圍
大多數(shù)生物分子是帶電荷的。
肽類和蛋白質(zhì)帶有多種電荷。從小分子的經(jīng)驗來看，已流動相ph可以成為改變保留值并因此而優(yōu)化帶電化合物分離度的有力工具。
肽類也是如此。
再次以使用血管緊張素ii和iii作為實例，下圖顯示在ph=2的條件下，ace超惰性色譜柱或填充有更具活性固定相的色譜柱上這兩種肽未實現(xiàn)分離。
通過將ph增加至7，這兩種色譜柱則均能提供良好的分離度。
然而，盡管ace超惰性色譜柱保持了良好的峰形，但填充低純度硅膠的色譜柱顯示其峰形較差和性能損失。
在極性化合物的許多反相應(yīng)用中觀察到了這種現(xiàn)象。
在中等ph值時，硅醇相互作用更為普遍，因此峰拖尾在活性固定相上變得更加明顯。
流動相ph對分離度的影響
色譜柱：250 x 4.6mm, 5μm c18 300å
流動相：
ph 2 a：0.1% tfa（溶于水中） b: 0.1% tfa（溶于乙腈中）
ph 7 a: 10mm nh4oac（溶于水中） b: 乙腈 15分鐘內(nèi)25%-40% b
流速：1.0 ml/min
檢測：uv 215nm
化合物：
1.血管緊張素ii
2.血管緊張素iii
3.血管緊張素i
ace 5 c18-300
超惰性硅膠
vydac 218tp
低純度“活性”硅膠
調(diào)節(jié)流動相的ph是提高選擇性的有力工具。只有基于超純硅膠的色譜柱才能在更高的ph值下保持性能。
備注：比較性分離物不代表所有應(yīng)用。