初綻頭角，免疫檢查點免疫監(jiān)視學(xué)說認為免疫系統(tǒng)就像一支 “優(yōu)良” 的一般，能夠持續(xù)地監(jiān)視體內(nèi)出現(xiàn)的異常細胞，識別并摧毀它們。同樣地，免疫系統(tǒng)可通過癌癥免疫周期(cancer-immunity cycle , cic)對抗殺死部分腫瘤細胞（可參考往期推文：免疫治療之非小細胞肺癌）。可腫瘤細胞似乎有 “免死” 一般，總神奇般 “死灰復(fù)燃”，人們對此很是困惑。直到 2006 年，allison 提出免疫檢查點，指程序性死亡受體及其配體，存在于免疫系統(tǒng)中，擔(dān)負著上調(diào)或下調(diào)免疫系統(tǒng)信號的作用(可參考往期推文：免疫檢查點大組團，誰能 “c 位出道”)[1]。簡單來說，凡是可以影響免疫反應(yīng)的重要靶點，都屬于免疫檢查點。最的免疫檢查點便是 2018 年榮獲諾貝爾獎的 pd-1 和 ctla-4，其具有免疫抑制功能，隨后腫瘤免疫治療開始進入廣大群眾的視野。這不，研究人員又發(fā)現(xiàn)了 hla-e 這一新的免疫檢查點，讓我們來一探究竟~新的突破， hla-e看到下面這張圖，是否又重新喚起了你兒時的記憶，no，no，no，這可是cancer cell的期刊封面。近期，四川大學(xué)華西醫(yī)院團隊發(fā)表題為 “immune checkpoint hla-e: cd94-nkg2a mediates evasion of circulating tumor cells from nk cell surveillance” 的封面研究論文[2]。
cancer cell封面（圖片來源：cancer cell 期刊）
對于腫瘤細胞與不同類型的免疫細胞之間的免疫檢查點分子對及 icbs 的研究，大多聚焦于實體腫瘤原發(fā)病灶或轉(zhuǎn)移灶中，對 ctcs 中腫瘤細胞的免疫監(jiān)視探索很少關(guān)注。在這篇文章中，該團隊發(fā)現(xiàn)了循環(huán)腫瘤細胞 (ctc)與 nk 細胞間的一種新的免疫檢查點-- hla-e，闡述了 ctc通過免疫檢查點分子對 hla-e: cd94-nkg2a 逃避 nk 細胞監(jiān)視的新機制[2]。作者巧妙地選取了西游記作為封面素材，將 ctc 喻為各路的妖精，通過扮弱等 “綠茶” 手段騙取唐三藏 (血小板) 的信任，并誤導(dǎo)豬八戒 (hla-e) 來保護自己，阻止孫悟空 (nks) 對妖精 (ctc) 的攻擊。形象生動地循解釋了 ctcs 與 nk 細胞之間的相互作用。■ 移動的 種子
循環(huán)腫瘤細胞 ctc1869 年，ashworth 提出循環(huán)腫瘤細胞(circulating tumor cells, ctcs)的概念[3]，目前是指存在于外周血中的各類腫瘤細胞。血液循環(huán)是腫瘤從原發(fā)病灶向遠處器官擴散的主要途徑[4]。ctc 就像一粒 “種子”，通過血液循環(huán)，經(jīng)侵襲、內(nèi)滲、循環(huán)、外滲和定殖5個步驟，最終發(fā)展成為惡性腫瘤(圖 1)。左右滑動
圖 1.血液傳播過程中 ctc-血液相互作用示意圖[5]
■ 發(fā)現(xiàn)及驗證
ctc 中新的免疫檢查點分子對hla-e: cd94-nkg2a為研究 ctcs 的相關(guān)轉(zhuǎn)移機制，采集了胰腺導(dǎo)管腺癌患者的原發(fā)性腫瘤、肝轉(zhuǎn)移灶以及肝門靜脈 (hepatic portal vein, hpv) 中的血液進行活檢，并利用單細胞測序技術(shù) (scrna-seq) 等技術(shù)，分析其轉(zhuǎn)錄組學(xué)特征和基因表達差異(圖 2a)。結(jié)果顯示，血液循環(huán)中觀察到 ctcs 和 nk 細胞之間存在主要相互作用，其中 hla-e 和 cd94-nkg2 在 ctc 和 nk 細胞之間具有烈的免疫相互作用(圖2b)。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù) nk 細胞都含有這種免疫抑制受體 nkg2a，且 ctc 中 hla-e 的表達水平高于實體病變腫瘤細胞中的表達水平(圖 2c-e)。因此，血液中 nkg2a 和 hla-e 之間上調(diào)的相互作用可能是由 hla-e 分子水平的增加驅(qū)動的[2]。左右滑動
圖 2. hla-e: cd94-nkg2a 免疫檢查點分子對的發(fā)現(xiàn)[2]
a: 機制研究方案；b: 不同來源腫瘤細胞與 nk 細胞間的免疫檢查點分子對；c-e: hla-e 在不同來源腫瘤細胞上的表達。
隨后，為驗證 ctc 中 hla-e 的免疫檢查點功能，在體外進行了 nk 細胞毒性實驗，在體內(nèi)構(gòu)建尾靜脈小鼠模型來模擬 ctc 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移，通過使用特異性抗體monalizumab阻斷 nkg2a 或敲低 hla-e 來中斷免疫檢查點。體內(nèi)外分析表明，ctc 和 nk 細胞通過免疫檢查點分子對 hla-e: cd94-nkg2a 相互作用。通過阻斷 nkg2a 或敲低 hla-e 表達來破壞這種相互作用可增強 nk 介導(dǎo)的體外腫瘤細胞殺傷作用，并防止體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移(圖 3)。
圖3.hla-e: cd94-nkg2a的體內(nèi)外功能驗證[2]
a: 體外細胞毒性實驗；b: 體內(nèi)尾靜脈模型中肺轉(zhuǎn)移情況。
■ 機制探究
ctc 通過參與血小板來源的 rgs18 上調(diào)免疫檢查點分子 hla-e那么 ctcs 是如何動員 hla-e 的呢？研究人員評估了可能與 hla-e 表達水平呈正相關(guān)的差異表達基因。觀察到 rgs18 并非在原發(fā)和轉(zhuǎn)移病灶的腫瘤細胞中表達，而是幾乎只在 ctc 中表達，ctc 通常被血小板覆蓋，而血小板是 rgs18 蛋白的主要來源[6]。機制研究表明，血小板源性 rgs18 通過 akt-gsk3b-creb 信號通路促進 hla-e 的表達，rgs18 過表達促進胰腺腫瘤肝轉(zhuǎn)移(圖 4)。
圖 4. ctc 通過 hla-e: cd94-nkg2a 逃避 nk 細胞的監(jiān)視[2]
機制探討：
1.當向血管內(nèi)灌注 ctc 時，ctc 會粘附并攝取攜帶 rgs18 的血小板。2.rgs18 抑制宿主細胞中 p-akt 的活化，進而抑制 gsk3β ser9 的磷酸化而穩(wěn)定 gsk3β 蛋白。3.gsk3β 蛋白通過 creb1的 ser133 位點磷酸化促進 creb1 的核轉(zhuǎn)位。4.creb1 與細胞核內(nèi) hla-e 基因啟動子區(qū) sxy 位點結(jié)合，上調(diào) ctc 表面 hla-e 表達和易位。5.nk 細胞表面 hla-e 與 nk 細胞表面的 cd94-nkg2a 相互作用，激活細胞內(nèi)的磷酸酶 shp1，抑制 nk 細胞的殺傷活性。
免疫檢查點阻斷(icb)，大放光彩說了這么多，免疫檢查點這一 “香餑餑” 究竟有何用處呢？言至于此，便不得不提免疫檢查點阻斷(immune checkpoint blockade, icb)療法，指的是基于程序性死亡受體及其配體的免疫檢查點的阻斷療法，通過抑制二者的結(jié)合，釋放免疫抑制調(diào)節(jié)，恢復(fù)t淋巴細胞的腫瘤特異性細胞毒性，從而提高宿主免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的攻擊性[7,8]。icb 已經(jīng)為多種類型癌癥的治療帶來了翻天覆地的變化，在過去的這些年，針對 pd-1 和 ctla-4，fda 已批準了 9 種阻斷免疫檢查點的單克隆抗體藥物，包括 7 個 pd-1/pd-l1，2 個 ctla-4 單抗，用于 20 多種適應(yīng)癥，包括轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、腎癌、肝細胞癌等(表 1)[9]。近年，一些新的免疫檢查點分子包括 tim-3、vista 和 lag-3 等也被引入研究。例如，許多臨床試驗(如 nct03470922) 評估了不同的阻斷 lag-3 的方法聯(lián)合抗 pd-1 治療作為潛在的新型 icbs[10]，經(jīng)過不懈努力，最終relatlimab 于 2022 年 3 月獲得美國 fda 批準治療黑色素瘤，成為獲批上市的抗 lag-3 抑制劑。藥物名稱 靶點 具體癌種
pembrolizumab pd-1 晚期子宮內(nèi)膜癌 (2022);晚期腎細胞癌 (2021);高危早期三陰性乳腺癌 (2021) 等
nivolumab pd-1 尿路上皮癌(2021);不可切除的惡性胸膜間皮瘤(2020);黑素瘤 (2017) 等
atezolizumab pd-l1 轉(zhuǎn)移性黑素瘤 (2020);肺泡軟部肉瘤 (2022);廣泛期小細胞肺癌(2019) 等
durvalumab pd-l1 轉(zhuǎn)移性膽道癌(2022);不可切除的肝細胞癌(2022);廣泛期小細胞肺癌 (2020) 等
tremelimumab ctla-4 不可切除的肝細胞癌 (2022);轉(zhuǎn)移性非小細胞肺癌(2022) 等
ipilimumab ctla-4 不可切除的惡性胸膜間皮瘤 (2020); 肝細胞癌(2020) 等
relatlimab lag-3 轉(zhuǎn)移性黑素瘤 (2022)
avelumab pd-l1 腎細胞癌 (2019) 等
cemiplimab pd-l1 轉(zhuǎn)移性基底細胞癌 (2021) 等
dostarlimab-gxly pd-l1 dmmr 子宮內(nèi)膜癌 (2023) 等
表 1. 美國 fda 已經(jīng)獲批上市的免疫檢查點阻斷藥物
（圖片來源：fda [11]）
■小結(jié)
小 m 帶大家進一步了解了腫瘤免疫中 “響當當” 的免疫檢查點，并詳細介紹了新的免疫檢查點 -- hla-e 及其相應(yīng)機制。其次，基于免疫檢查的阻斷療法給腫瘤免疫之路帶來的曙光，針對經(jīng)典免疫檢查點的藥物已獲批上市，多種新型免疫檢查點百花齊放，共同對抗腫瘤這個“大魔頭”。
相關(guān)產(chǎn)品
monalizumab
monalizumab 是一種靶向自然殺傷細胞群 2a (nkg2a) 的免疫檢查點抑制劑。monalizumab 是一種人源化抗 nkg2a 的單克隆抗體，可增加 ifn-γ 產(chǎn)生，從而促進自然殺傷細胞功能。monalizumab 可用于頭頸部鱗狀細胞癌 (hnscc) 的研究。
bms-1166
bms-1166 是一種有效的 pd-1/pd-l1 免疫檢查點抑制劑。bms-1166 誘導(dǎo) pd-l1 二聚化并阻斷其與 pd-1 的相互作用，ic50 為 1.4 nm。bms-1166 拮抗 pd-1/pd-l1 免疫檢查點對 t 細胞活化的抑制作用。
tuvonralimab
tuvonralimab (psb-205; ql1706) 是一種雙重免疫檢查點阻斷劑，包含有抗 pd-1 igg4 和抗 ctla-4 igg1 抗體、iparomlimab 和 tuvonralimab。
ca-170
ca-170 是一種口服的 vista 和 pd-l1 雙重抑制劑。ca-170 對 pd-l1/l2 和 vista 抑制的 t 細胞的增殖和效應(yīng)因子功能具有有效的拯救作用，選擇性優(yōu)于其他免疫檢查點蛋白以及廣泛的受體和酶。
bms-37
bms-37 是一種 pd-1/pd-l1 免疫檢查點抑制劑。bms-37 可作為 pd-l1 配體合成 protac 分子。
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參考文獻
[1] korman aj, et al. checkpoint blockade in cancer immunotherapy. adv immunol. 2006;90:297-339.[2] liu x, et al. immune checkpoint hla-e: cd94-nkg2a mediates evasion of circulating tumor cells from nk cell surveillance. cancer cell. 2023;41(2):272-287.e9.[3] ignatiadis m, et al. circulating tumor cells and circulating tumor dna for precision medicine: dream or reality?. ann oncol. 2014;25(12):2304-2313.[4] ganesh k, et al. targeting metastatic cancer. nat med. 2021;27(1):34-44.[5] ward mp, et al. platelets, immune cells and the coagulation cascade; friend or foe of the circulating tumour cell?. mol cancer. 2021;20(1):59. published 2021 mar 31.[6] ward mp, et al. platelets, immune cells and the coagulation cascade; friend or foe of the circulating tumour cell?. mol cancer. 2021;20(1):59. published 2021 mar 31.[7] tang j, et al. trial watch: the clinical trial landscape for pd1/pdl1 immune checkpoint inhibitors. nat rev drug discov. 2018;17(12):854-855.[8] sanmamed mf, et al. a paradigm shift in cancer immunotherapy: from enhancement to normalization. cell. 2018;175(2):313-326.[9] twomey jd, et al. cancer immunotherapy update: fda-approved checkpoint inhibitors and companion diagnostics. aaps j. 2021;23(2):39. published 2021 mar 7.[10] morad g, et al. hallmarks of response, resistance, and toxicity to immune checkpoint blockade. cell. 2021;184(21):5309-5337.[10] fda.gov/search?s=dostarlimab-gxly&sort_bef_combine=rel_desc