抗體沒做預(yù)試，用什么樣的稀釋度比較好呢？
不同抗體，即使是同一公司的抗體，其的抗體稀釋度也是不一樣的，需要你實(shí)驗(yàn)摸索。我覺得轉(zhuǎn)膜過夜好像沒有必要吧，轉(zhuǎn)膜的目的也就是將蛋白轉(zhuǎn)到膜上就行 啦，何必浪費(fèi)時(shí)間呢。至于具體的轉(zhuǎn)膜時(shí)間，還要看你的目的蛋白分子量的大?。晦D(zhuǎn)膜的設(shè)備，是半干式，還是濕式。一抗當(dāng)然可以過夜，如果你想所短 western blot時(shí)間的話，可以增高一抗的孵育溫度，我們實(shí)驗(yàn)室一般37度，兩小時(shí)就足夠了；你可以參照抗體說明書。至于一抗和二抗得稀釋度，你可以一抗 1：1500；二抗1：20000試試。另外建議你洗膜時(shí)，多洗幾次，是在封閉；一抗和二抗后至少是5x5min，跑一張好膜不容易，多盡點(diǎn)心吧，這 樣不會(huì)浪費(fèi)你的時(shí)間，只會(huì)節(jié)省你的時(shí)間！