由光源氙弧燈發(fā)出的光通過切光器使其變成斷續(xù)之光以及激發(fā)光單色器變成單色光后，此光即為熒光物質的激發(fā)光，被測的熒光物質在激發(fā)光照射下所發(fā)出的熒光，經(jīng)過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上，由其所發(fā)生的光電流經(jīng)過放大器放大輸至記錄儀，激發(fā)光單色器和熒光單色器的光柵均由電動機帶動的凸輪所控制，當測繪熒光發(fā)射光譜時，將激發(fā)光單色器的光柵，固定在適當?shù)募ぐl(fā)光波長處，而讓熒光單色器凸輪轉動，將各波長的熒光強度訊號輸出至記錄儀上，所記錄的光譜即發(fā)射光譜(emission spectrum)，簡稱熒光光譜。
熒光分光光度計的構成：
1. 光源：為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內強度幾乎相等，故較常用。
2．激發(fā)單色器：置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。
3．發(fā)射單色器：置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4． 樣品室：通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。
5． 檢測器：一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉為電信號。