采用高壓滅菌，每次使用前必須向鍋內(nèi)加水，加入量以達(dá)到水位標(biāo)記為度。切忌空燒或加水不足導(dǎo)致中途燒干而引起爆炸事故。
放入鍋內(nèi)滅菌的培養(yǎng)基、物料等，排放時需留有縫隙，使蒸汽暢通。如果疊放得過于緊密，將阻礙蒸汽穿透，造成物料內(nèi)外溫度不均勻，形成“死角”，致使滅菌不*。
加熱滅菌時，先打開排氣閥，使鍋內(nèi)冷空氣排出，當(dāng)水沸騰時，大量蒸汽從排氣閥中沖出，冷空氣被排盡，即可關(guān)閉排氣閥。若滅菌鍋內(nèi)冷空氣未排盡，則它受熱后很快膨脹，壓力上升，使壓力與溫度形成差異，這時雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，產(chǎn)生壓力雖高而實際滅菌溫度低的假壓現(xiàn)象，致使滅菌不*。排除冷空氣也可采用集中排氣法，即當(dāng)壓力達(dá)到0.049兆帕?xí)r打開排氣閥排氣，壓力降到零再關(guān)閉排氣閥升壓滅菌。后一種方法只適合器皿、刀具、棉織物、口罩等，而料瓶、料袋，特別是液體培養(yǎng)基等不宜采用。因為容易造成袋膜脹破、瓶塞脫落、液體沸騰外溢。
滅菌結(jié)束后，一般應(yīng)自然緩慢降壓。若排氣太快鍋內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓，瓶、袋內(nèi)壓力大于鍋內(nèi)壓力，這與集中放氣一樣會造成料袋鼓氣膨脹而拉薄脹破或液體外溢等情況發(fā)生。