免疫細(xì)胞（immune cells）是指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等，其在免疫細(xì)胞療法中扮演著至關(guān)重要的角色。
簡介
免疫細(xì)胞按照來源，可分為髓系和淋巴兩類。
髓系免疫細(xì)胞（myeloid immune cells）起源于骨髓，并包括多種類型的細(xì)胞，如單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞等。這些細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中具有重要的功能，包括吞噬病原體、產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和抗原呈遞等。
淋巴細(xì)胞（lymphoid immune cells）起源于骨髓，并在淋巴組織（如脾臟、淋巴結(jié)和扁桃體）中發(fā)揮重要的免疫功能。它們包括t細(xì)胞、b細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等。
培養(yǎng)方法
2.1樣本采集與預(yù)處理
外周血來源的pbmc是分離特定免疫細(xì)胞亞群的一個常見方法。具體為外周血采集后，裝入含有適宜抗凝劑的無菌容器中防止凝集，其中要求外周血與抗凝劑輕柔混勻。目前，常用的抗凝劑有肝素、edta和枸櫞酸鈉等。適合于后期免疫細(xì)胞培養(yǎng)的抗凝劑常用是肝素。
2.2樣本制備
單個核細(xì)胞（pbmc）的獲?。褐苽浞椒槌Ｓ胒icoll密度梯度離心法。具體方法如下：
①將10ml外周血轉(zhuǎn)入50ml離心管中，加入10ml pbs溶液稀釋，輕輕混勻；
②取兩支15ml離心管，先加入5ml ficoll溶液。然后將稀釋的血液輕輕加到兩支離心管的ficoll上層，一定要輕柔，避免兩種溶液混合在一起，每只離心管各10ml稀釋血液；
③900g，離心30min，升1降1。
④離心完成后，依次從上而下，分別收集血漿（微黃色層）、單個核細(xì)胞（白膜層）。
⑤單個核細(xì)胞（白膜層）加入1-2倍的pbs，400g，離心10min后去掉上清，再加入1640培養(yǎng)基進行相同操作的清洗。
2.3細(xì)胞培養(yǎng)
加入培養(yǎng)液1ml重懸細(xì)胞，混勻計數(shù)，按照計數(shù)結(jié)果調(diào)整細(xì)胞密度為3-10x105細(xì)胞/ml進行鋪板培養(yǎng)。詳細(xì)培養(yǎng)添加主要組分如下：
（1）cd8+細(xì)胞培養(yǎng)從人外周血單個核細(xì)胞中用il-2、cd3/cd28激活劑體外激活和擴增cd8+細(xì)胞。
il-2對cd8/ctl的擴增、存活和功能至關(guān)重要【1-2】。
離體產(chǎn)生記憶干t細(xì)胞的方法依賴于cd3 / cd28共刺激以及使用諸如il-7和il-15之類的細(xì)胞因子【3】。
（2）nk細(xì)胞培養(yǎng)
從人外周血單個核細(xì)胞中用il-2、il-15、 il-12 、il-18等體外激活和擴增nk細(xì)胞【4】。
nk細(xì)胞的殺傷活性，需要在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加一些刺激劑，如il-2、il-15等。il-2和il-15的加入可以促進nk細(xì)胞的增殖和分化，同時提高細(xì)胞的殺傷活性。促進nk細(xì)胞的生長和擴增。在一些研究中，還會添加一些其他的細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-12（il-12）、白細(xì)胞介素-18（il-18）等，以提高nk細(xì)胞的細(xì)胞毒性和殺傷作用。
（3）dc細(xì)胞培養(yǎng)
從人外周血單個核細(xì)胞中用gm-csf、il-4和tnf-α體外誘導(dǎo)擴增dc細(xì)胞。
gm-csf，il-4和tnf-α培養(yǎng)系統(tǒng)中人單核細(xì)胞衍生樹突狀細(xì)胞（單dc）的粘附和非粘附細(xì)胞的純度，表型，抗原攝取能力和t淋巴細(xì)胞刺激能力。結(jié)果表明，粘附dc的純度和抗原攝取能力均顯著高于非粘附dc【5】。
（4）巨噬細(xì)胞培養(yǎng)
從人外周血單個核細(xì)胞中用gm-csf、m-csf體外誘導(dǎo)擴增巨噬細(xì)胞。
m1和m2巨噬細(xì)胞可以被人重組gm-csf和m-csf誘導(dǎo)【6】。
3.應(yīng)用
免疫細(xì)胞不僅可以消滅癌細(xì)胞，還可消滅傳染病和自身免疫疾病【7】。
4.參考文獻
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