瘧原蟲探針法熒光定量pcr試劑盒組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 u/l,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 u/l,100 u/l,50 u/l,25 u/l,12.5 u/l,6.25 u/l,3.12 u/l,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 u/l。如配制100 u/l標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 u/l的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液a:1×10ml。
5、 檢測稀釋液b:1×10ml。
實(shí)驗(yàn)注意事項:
1)rt-pcr可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和id號;
3)客戶盡量不要提供dna或rna樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于trizol液中。
實(shí)時熒光定量pcr(quantitative real-time pcr,qpcr)是指在pcr反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個pcr進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量pcr的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對dna、rna樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):dna或rna的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、rna提取、cdna合成、qpcr。