熒光定量試劑盒基本反應步驟

發(fā)布時間:2024-03-26
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
1、模板dna的變性:模板dna經加熱至94℃左右一定時間后,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;
2、模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
3、引物的延伸:dna模板--引物結合物在taq酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留復制鏈。
重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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