中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
gb/t 5009.218-2008
水果和蔬菜中多種農(nóng)藥殘留量的測定
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水果和蔬菜中211種農(nóng)藥殘留量的測定方法（見表a.1和表a. 2），以及水果和蔬菜中107種農(nóng)藥殘留量的測定方法（見表b.1）。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于菠菜、大蔥、番茄、柑橘、蘋果中211種農(nóng)藥殘留量的測定和蘋果、梨、白菜、蘿卜、藕、大蔥、菠菜、洋蔥中107種農(nóng)藥殘留量的測定。
水果和蔬菜中211種農(nóng)藥殘留量測定方法的定量限（loq）參見表c.1和表c.2，水果和蔬菜中
107種農(nóng)藥殘留量測定方法的定量限（loq）參見表d.1。
2水果和蔬菜中211種農(nóng)藥殘留量的測定
2.1原理
試樣中用水-丙酮均質(zhì)提取，經(jīng)二氯甲烷液液分配，以凝膠色譜柱凈化，再經(jīng)活性炭固相柱凈化，洗脫液濃縮并溶解定容后，供氣相色譜質(zhì)譜（gc-ms）測定和確證，外標(biāo)法定量。
2.2試劑和材料
除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為二級水，電導(dǎo)率25℃≤0. 10 ms/m。
2.2.1丙酮（c3h6o）：殘留級。
2.2.2二氯甲烷（ch2cl2）：殘留級。
2.2.3乙酸乙酯（c4h8o2）：殘留級。
2.2.4環(huán)己烷（cyclo-c6h14）：殘留級。
2.2.5正己烷（n-c6h14）：殘留級。
2.2.6甲醇（ch4o）：殘留級。
2.2.7苯（c6h6）：殘留級。
2.2.8氯化鈉（nacl）：優(yōu)級純。
2.2.9無水硫酸鈉（na2so4）：650℃灼燒4 h，貯于密封容器中備用。
2.2.10氯化鈉水溶液：20g/l。
2.2.11活性炭固相萃取柱（pesticarb）：0.5g，或相當(dāng)者，使用前用5ml正己烷預(yù)淋洗。
2.2.12 211種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：純度均≥93.5%，見表a.1和表a. 2。
2.2. 13標(biāo)準(zhǔn)溶液
2.2.13.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別準(zhǔn)確稱取適量的每種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮或相應(yīng)溶劑（見表a.1和表a.2）配制成濃度為500μg/ml~1000μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。該溶液可在0℃~4℃冰箱中保存12個月。
2.2.13.2標(biāo)準(zhǔn)中間工作液：根據(jù)農(nóng)藥的性質(zhì)及其在色譜保留時間的不同，將211種農(nóng)藥分成a.b兩組，分別準(zhǔn)確移取一定體積的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液，可根據(jù)需要用丙酮稀釋成適用濃度的a組混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液和b組混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液。該溶液可在0℃~4℃冰箱中保存6個月。
2.2.13.3混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取一定體積的a組混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液和b組混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液，可根據(jù)需要用正己烷稀釋成適用濃度的a組混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和b組混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。該溶液可在0℃~4℃冰箱中保存1個月。
2.3儀器和設(shè)備
2.3.1氣相色譜質(zhì)譜儀：配有電子轟擊源（ei）。
2.3.2凝膠色譜儀：配有餾分收集器。
2.3.3食品搗碎機(jī)。
2.3.4均質(zhì)器。
2.3.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。
2.3.6氮吹儀。
2.3.7漩渦混合器。
2.3.8無水硫酸鈉柱：7.5cmx1.5cm（內(nèi)徑），內(nèi)裝5cm高無水硫酸鈉。
2.3.9具塞錐形瓶：250ml。
2.3.10分液漏斗：250ml。
2.3.11濃縮瓶：50ml、250ml。
2.3. 12移液器：1000μl、100μl、10μl。
2.4試樣制備與保存
2.4.1試樣制備
取水果或蔬菜樣品500g，或去殼去籽、去皮去莖、去根去冠（不可用水洗滌），將其可食用部分切碎后，依次用食品搗碎機(jī)將樣品加工成漿狀?；靹?，均分成兩份作為試樣，分裝入潔凈的盛樣袋內(nèi)，密閉，標(biāo)明標(biāo)記。
2.4.2試樣保存
將試樣于0℃~4℃保存。
注：在抽樣及制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
2.5測定步驟
2.5.1提取
稱取約25g（精確至0.1g）試樣于250ml具塞錐形瓶中，加入20ml水，混搖后放置1 h。然后加入100ml丙酮，高速均質(zhì)提取3 min。將提取液抽濾于250ml濃縮瓶中。殘渣再用50ml丙酮重復(fù)提取一次，合并濾液，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約20ml。將濃縮提取液轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中。
在上述分液漏斗中，加入100ml氯化鈉水溶液和100ml二氯甲烷，振搖3min，靜置分層，收集二氯甲烷相。水相再用2×50ml二氯甲烷重復(fù)提取兩次，合并二氯甲烷相。經(jīng)無水硫酸鈉柱（2.3.8）脫水，收集于250ml濃縮瓶中，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，加入5ml乙酸乙酯環(huán)己烷（1+1）以溶解殘渣，并用0.45μm濾膜過濾，待凈化。
2.5.2凈化
2.5.2.1凝膠色譜凈化（gpc）
2.5.2.1.1凝膠色譜條件
a）凈化柱：700mm×25mm，bio beads s-x3，或相當(dāng)者。
b）流動相：乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）。
c）流速：5.0ml/min.
d）樣品定量環(huán)：5.0ml。
e）預(yù)淋洗體積：50ml。
f）洗脫體積：210ml。
g）收集體積：105ml~185ml。
2.5.2.1.2凝膠色譜凈化步驟
將5ml待凈化液按2.5.2.1.1規(guī)定的條件進(jìn)行凈化，合并餾分收集器中的收集液于250ml濃縮瓶中，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，加入2ml正已烷以溶解殘渣，待凈化。
2. 5.2.2固相萃取凈化（spe）
將2ml溶解液傾入已預(yù)淋洗后的活性炭固相萃取柱中，用30ml乙酸乙酯-正己烷（2+3）進(jìn)行洗脫。收集全部洗脫液于50ml濃縮瓶中，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至干。用乙酸乙酯溶解并定容至2.0ml，供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
2.5.3氣相色譜-質(zhì)譜測定
2.5.3.1氣相色譜-質(zhì)譜條件
a）色譜柱：30m×0. 25mm（內(nèi)徑），膜厚0.25μm，db-5ms石英毛細(xì)管柱，或相當(dāng)者。
c）進(jìn)樣口溫度：280℃。
d）色譜-質(zhì)譜接口溫度：280℃。
e）載氣：氦氣，純度≥99.999%，1.2ml/min。
f）進(jìn)樣量：1μl。
g）進(jìn)樣方式：無分流進(jìn)樣，1.5min后開閥。
h）電離方式：ei。
i）電離能量：70 ev。
j）測定方式：選擇離子監(jiān)測方式。
k）溶劑延遲：5 min。
l）選擇監(jiān)測離子（m/z）：將211種農(nóng)藥分成a、b兩組，每種農(nóng)藥分別選擇1個定量離子，2個~3個定性（陽性確證）離子。兩組選擇監(jiān)測離子時間設(shè)定參數(shù)參見表e.1和表e.2，每種農(nóng)藥的定量離子和定性離子參見表c.1和表c.2。
2.5.3.2定量測定
根據(jù)樣液中被測農(nóng)藥含量，選定濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣液等體積分組分時段參插進(jìn)樣測定。外標(biāo)法定量。在上述氣相色譜質(zhì)譜條件下，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時間參見表c.1和表c.2，氣相色譜-質(zhì)譜選擇離子色譜圖參見圖f.1和圖f.2。
2.5.3.3定性測定
對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液按上述規(guī)定的條件進(jìn)行測定時，如果樣液與混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的選擇離子圖中，在相同保留時間有峰出現(xiàn)，則根據(jù)定性選擇離子的種類及其豐度比對其進(jìn)行陽性確證。各種農(nóng)藥的選擇離子的種類及其豐度比參見表c.1和表c.2。
2.6結(jié)果計算
按式（1）計算試樣中每種農(nóng)藥殘留含量：
式中：
xi——試樣中農(nóng)藥i殘留量，單位為微克每克（μg/g）；
ai——樣液中農(nóng)藥i的峰面積（或峰高）；
ci——標(biāo)準(zhǔn)工作液中農(nóng)藥i的濃度，單位為微克每毫升（μg/ml）；
v——樣液最終定容體積，單位為毫升（ml）；
ais——標(biāo)準(zhǔn)工作液中農(nóng)藥i的峰面積（或峰高）；
m——最終樣液代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。
2.7精密度
本方法對211種農(nóng)藥在0. 1 mg/kg~5. 0 mg/kg濃度水平，添加回收率和精密度參見表c.1和表c.2。
3水果和蔬菜中107種農(nóng)藥殘留量的測定
3.1原理
試樣中農(nóng)藥用有機(jī)溶劑提取，再經(jīng)液液分配除去干擾物質(zhì)，用氣相色譜質(zhì)譜儀測定，當(dāng)被測組分不能滿足分離條件時，更換不同極性色譜柱加以分離，內(nèi)標(biāo)法定量。
3.2試劑和材料
除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為二級水，電導(dǎo)率25℃≤0.10 ms/m。
3.2. 1丙酮（c3 h6o）：重蒸餾。
3.2.2石油醚：30℃~60℃，重蒸餾。
3.2.3正己烷（n-c6h14）：重蒸餾。
3.2.4苯（c6h6）。
3.2.5二氯甲烷（ch2cl2）：重蒸餾。
3.2.6甲醇（ch4o）。
3. 2.7氯化鈉（nacl）。
3.2.8無水硫酸鈉（na2so4）：在550℃灼燒4 h，置入干燥器中冷卻，備用。
3.2.9農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：107農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品純度均≥91%，見表b.1。
3.2. 10內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：內(nèi)吸磷，純度≥98%；乙基谷硫磷，純度≥98%。
3.2.11農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別準(zhǔn)確稱取附錄b中每種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品，見表b.1的溶劑選擇，用丙酮、苯、二氯甲烷、甲醇或正己烷分別配制成濃度為1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再根據(jù)需要用丙酮配制成不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)儲備液保存于4℃冰箱中，可使用一年；混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液保存于4℃冰箱中，可使用一個月。
3.2.12內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別準(zhǔn)確稱取內(nèi)吸磷和乙基谷硫磷標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮配制成1mg/ml的混合內(nèi)標(biāo)儲備液，根據(jù)需要再稀釋成合適濃度的內(nèi)標(biāo)工作液。
3.3儀器和設(shè)備
3.3.1氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：帶有電子轟擊離子源（ei）。
3.3.2快速漩流濃縮儀：配有冷卻循環(huán)水機(jī)。
3.3.3組織搗碎機(jī)。
3.3.4高速均質(zhì)器：8000r/min~24000r/min。
3.3.5離心機(jī)：3000r/min。
3.4測定步驟
3.4.1制樣
取約200g蔬菜、水果試樣，經(jīng)組織搗碎機(jī)破碎成漿狀。
3.4.2提取
稱取10.0g混勻的試樣，于100ml離心管中，加入25ml丙酮，定量加入內(nèi)標(biāo)工作溶液，高速均質(zhì)2 min，于3 000r/min下離心5 min，將上清液經(jīng)墊有濾紙的漏斗移至250ml分液漏斗中。于離心管中再加入25ml丙酮，高速均質(zhì)2 min，在3000r/min下離心5 min，.上清液經(jīng)過濾合并至分液漏斗中。
3. 4.3凈化
上述分液漏斗中加入20ml石油醚、20ml二氯甲烷，用力振搖1 min，將下層水相轉(zhuǎn)移至另一只分液漏斗中，上層有機(jī)相移至具塞三角瓶中。向裝有水相的分液漏斗中加入2g氯化鈉，用力振搖至氯化鈉基本溶解，加入2×20ml二氯甲烷，用力振搖1 min，將下層有機(jī)相合并于三角瓶中。向三角瓶中加入約15g無水硫酸鈉，靜置約30min。
將脫水后提取液經(jīng)墊有濾紙的漏斗轉(zhuǎn)移至快速漩流濃縮儀的濃縮瓶中，用2×20ml二氯甲烷洗滌硫酸鈉，一并轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中。設(shè)定快速漩流濃縮儀水浴溫度為30℃、扇葉旋轉(zhuǎn)速度為4000r/min，冷凝套內(nèi)循環(huán)水溫度控制在5℃~10℃之間，在此條件下濃縮至1ml，供氣相色譜質(zhì)譜分析。
3.4.4氣相色譜-質(zhì)譜測定
3.4.4.1氣相色譜測定條件
a）色譜柱：石英毛細(xì)管柱db-5ms，柱長25 m，內(nèi)徑0.25 mm，涂膜厚度0.25μm。
石英毛細(xì)管柱db-35ms，柱長25 m，內(nèi)徑0. 25 mm，涂膜厚度0.25μm。
石英毛細(xì)管柱db-1701，柱長25 m，內(nèi)徑0. 25 mm，涂膜厚度0.25μm。
柱與進(jìn)樣口汽化室之間接1 m長的預(yù)柱。
b）載氣：氦氣，純度≥99.999%。
c：）載氣流速：1ml/min。
d）柱溫：初始溫度為50℃，以20℃/min程序升溫至120℃，再以3℃/min程序升溫至280℃，保持15 min。
e）進(jìn)樣量：2μl。
f）進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1min后打開分流閥。
g）進(jìn)樣口溫度：260℃。
3.4.4.2質(zhì)譜測定條件
a）接口溫度：250℃。
b）電離方式：ei。
c）電子能量：70 ev。
d）離子源溫度：200℃。
e）檢測電壓（光電倍增器）：350v（檢測時可根據(jù)靈敏度作調(diào)整）。
f）掃描范圍：全掃描檢測質(zhì)量范圍為50 u~550 u，掃描速度0.45 s。
g）選擇離子檢測：根據(jù)被測物的保留時間，在對應(yīng)的時間窗內(nèi)設(shè)定特征離子，107種農(nóng)藥所選擇的篩選和定性離子參見表d.1。
h）掃描速度：0.1 s。
i）溶劑延時：5 min。
3.4.4.3氣相色譜-質(zhì)譜測定
根據(jù)上述測定條件，首先注入含內(nèi)標(biāo)的被測農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其濃度約為2μg/ml，確定內(nèi)標(biāo)和被測農(nóng)藥的保留時間（rt值），并設(shè)置或校準(zhǔn)被測農(nóng)藥檢測離子的時間窗。為保證有足夠的檢測靈敏度，改善在一次分析時對不能較好分離物質(zhì)的檢測，設(shè)定兩個保留時間窗掃描程序，在每一個時間窗內(nèi)少放幾個選擇離子，將在色譜柱上不能分離的被測物分別編人兩個不同的掃描程序內(nèi)，每個樣品進(jìn)兩次，進(jìn)行兩次分析。當(dāng)被測組分不能滿足分離條件時，更換不同極性色譜柱加以分離。107種農(nóng)藥在三種不同色譜柱上的保留時間和比保留時間參見表g.1，總離子流圖參見圖h.1~圖h.3。
3.4.5空白試驗
除添加試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。
3.5結(jié)果計算
每一種農(nóng)藥殘留量選擇其基峰離子的質(zhì)量色譜圖，6min~34min內(nèi)被測農(nóng)藥以內(nèi)吸磷為內(nèi)標(biāo)，
34min~64min內(nèi)被測農(nóng)藥以乙基谷硫磷為內(nèi)標(biāo)，按式（2）分別計算：.
式中：
x——樣品中每一種被測農(nóng)藥殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
h——樣品中被測農(nóng)藥選擇離子的峰高或峰面積；
h'i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物選擇離子的峰高或峰面積；
c’——標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的濃度，單位為微克每毫升（μg/ml）；
mi——樣品中添加內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量，單位為微克（pg）；
hi——標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥選擇離子的峰高或峰面積；
h'——樣品中內(nèi)標(biāo)物選擇離子的峰高或峰面積；
c'i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度，單位為微克每毫升（μg/ml）；
m——樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。
3.6回收率和精密度
本方法回收率和精密度參見附錄i。