抗體的保存條件有哪些?

發(fā)布時(shí)間:2024-03-25
你知道抗體的保存條件都有哪些嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
一、抗體的穩(wěn)定性
抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一,其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果。在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域)以beta片層(beta-sheet)形式堆疊,形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治結(jié)構(gòu),輕鏈和重鏈通過(guò)保守的二硫鍵形成具有三個(gè)結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白,大大提高了分子本身的穩(wěn)定性。
抗體主要涉及化學(xué)或物理不穩(wěn)定性。化學(xué)不穩(wěn)定性是指多肽或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)共價(jià)鍵的形成或破壞。蛋白質(zhì)化學(xué)失活機(jī)制主要包括聚合作用、重要氨基酸的變化,如肽鍵在稀酸條件下被水解;半胱氨酸、色氨酸、甲硫氨酸的氧化;二硫鍵的還原;用金屬離子修飾巰基形成硫醇鹽;天冬酰胺與谷氨酰胺的脫酰胺;氨基酸消旋,寡聚蛋白解聚成單體等。而抗體結(jié)構(gòu)的展開(kāi)、解離、變性、聚集和沉淀被稱(chēng)為構(gòu)象或物理不穩(wěn)定性。
zhong所周知,儲(chǔ)存條件(ph值、緩沖液類(lèi)型、穩(wěn)定劑、防腐劑、蛋白酶抑制劑、溫度和反復(fù)解凍)在抗體穩(wěn)定性中起著至關(guān)重要的作用。
二、保存溫度
每種樣品均有其穩(wěn)定的溫度范圍,溫度升高會(huì)引起許多物理和化學(xué)變化,如溫度升高10℃,氧化反應(yīng)約加快數(shù)倍,酶促反應(yīng)約增加1-3倍;又如多數(shù)蛋白在60℃以上開(kāi)始變性,熱變性通常是不可逆的,不利于物質(zhì)的穩(wěn)定存在。另外,適宜的溫度(如室溫)又是微生物污染的重要條件。而低溫卻可以抑制氧化、水解等化學(xué)反應(yīng)及微生物生長(zhǎng),使微生物處于生命遲緩和隱蔽狀態(tài)。故大多數(shù)生化樣品選擇低溫保存,其穩(wěn)定性可大大增加。
通常蛋白質(zhì)短期在4℃中儲(chǔ)存穩(wěn)定,不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃,而極不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)存儲(chǔ)在-70℃。然而在冷凍過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的小冰晶,形成更大的冰-水界面表面積,冰-水表面面積的增加與蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化和蛋白質(zhì)聚集的增加有關(guān),因此需要避免反復(fù)凍融。
凍干粉抗體,穩(wěn)定性高,可在-20℃、-80℃條件中長(zhǎng)時(shí)間保存(長(zhǎng)達(dá)數(shù)年),4℃環(huán)境也較為穩(wěn)定。權(quán)衡各種因素,凍干粉抗體一般保存在-20℃,取用方便,保存時(shí)間長(zhǎng)。粉末狀抗體溶解后即變成液體狀態(tài)抗體,保存條件發(fā)生變化。需要按照說(shuō)明書(shū)或者液體抗體保存方法(最好分裝)。
三、蛋白質(zhì)保存濃度
通常蛋白質(zhì)的濃度也是影響穩(wěn)定性重要因素,一般蛋白質(zhì)在高濃度(1 mg/ml或者更高)溶液中比較穩(wěn)定,不容易降解,因?yàn)橐簯B(tài)蛋白質(zhì)容易受水化作用的影響,保存時(shí)濃度不能太低,否則可能引起亞基蛋白和輔助因子解離,會(huì)導(dǎo)致結(jié)構(gòu)松散,穩(wěn)定性下降而易于失活。
因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白(bsa)作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來(lái)防止降解。加入bsa能夠抑制冷凍引起的蛋白質(zhì)去折疊,通過(guò)增加蛋白質(zhì)的起始濃度,能夠增強(qiáng)在凍融過(guò)程中蛋白質(zhì)制備物對(duì)損傷的耐受性。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的起始濃度增高時(shí),抗體變性的百分比也會(huì)下降。另一方面,加入的蛋白還能盡可能減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。
當(dāng)抗體稀釋至工作濃度后,應(yīng)當(dāng)及時(shí)使用,在4℃盡量不要超過(guò)1天。
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