1. 加規(guī)范品：在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔，順次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(主張每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)
2. 加樣：elisa試劑盒別離設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl，然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：elisa試劑盒除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先參加顯色劑a50μl，elisa試劑盒再參加顯色劑b50μl，悄悄震動(dòng)混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反響(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定：elisa試劑盒以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序丈量各孔的吸光度(od值)。 測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。