莖尖培養(yǎng)

發(fā)布時(shí)間:2024-03-12
蘭花莖尖培養(yǎng)多從生長(zhǎng)的植株上切取3~20毫米的莖,去掉苞片,用水沖洗干凈后,放入75%酒精中浸泡數(shù)秒,取出,轉(zhuǎn)入加有吐溫-20的漂白粉清液中浸泡約10分鐘,再用無(wú)菌水沖洗2~3次,置消毒濾紙中吸干水分。然后在無(wú)菌條件下,用解剖刀將外表的幼葉剝掉,切取0.5~0.8毫米大小的芽,接種在固體培養(yǎng)基上,保持室溫23~24c,并給予1500~2000勒克斯、每天12~14小時(shí)的光照,誘導(dǎo)原球莖發(fā)生。常用的培養(yǎng)基為ms和bs培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中一般不使用2,4-二氯苯氧乙酸,而常加人10%的椰子汁、帶乙酸0.5~1.0毫克/升和6-芐基嘌呤0.1~1.0毫克/升。有條件的單位,應(yīng)盡量使用液體振蕩培養(yǎng),水平振蕩可快些,而立體振蕩應(yīng)慢些,一般每分鐘2次即可。若無(wú)振蕩設(shè)備,可手動(dòng)每天振蕩2~3次。振蕩不僅有利于原球莖球狀體形成,也有沖洗周圍組織的作用,防止組織的老化與枯死。通常在接種后不久,生長(zhǎng)點(diǎn)組織先呈綠色,接著生長(zhǎng)莖葉,以后在生長(zhǎng)點(diǎn)基部的組織開始肥大,形成原球莖。原球莖可以不斷分割繼代培養(yǎng),加速繁殖,直至達(dá)到所需的個(gè)數(shù)為止,然后再轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)。此時(shí)培養(yǎng)基中離子濃度應(yīng)調(diào)低些,約15~20毫克/升較好,或在分化培養(yǎng)基中加人椰子汁等天然物質(zhì),原球莖便會(huì)很快再生成植株。而再分化的個(gè)體必須移人大的培養(yǎng)器內(nèi),繼續(xù)培養(yǎng)3~6個(gè)月,直至小苗有3~4片葉、3~4條根、高3~10厘米時(shí)才能移出,并將根部瓊脂清洗干凈后,栽入泥炭或蛭石中,但要注意保濕和弱光,并定期澆水施肥,促進(jìn)生長(zhǎng)。
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