一、培養(yǎng)基的制備
1、 母液的配制和保存
為減少工作量一般將各種成分配成比所需濃度高10-100被的母液，用時按比例稀釋。在配制大量元素無機鹽母液時，要防止在混合各種鹽類時產(chǎn)生沉淀，為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合，同時在混合時要注意先后順序，把鈣離子、錳離子、鋇離子和硫酸根、磷酸根錯開，以免發(fā)生作用，相互結合生成沉淀。另外在混合各種無機鹽時，稀釋度要大，慢慢混合，同時邊混合邊攪拌。
配制好的母液分別貼好標簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期及配制1l培養(yǎng)基時應取的量。母液儲存于2-4℃的冰箱中。
2、 培養(yǎng)基的配制
稱取規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖，加入一定量的蒸餾水，加熱使其溶解。
在燒杯中加入規(guī)定量的各種母液，包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的特殊補加物。
將母液混合物加入融化的瓊脂中，再加入糖類物質(zhì)，定容至所需體積，攪勻。
用1mol/l的氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)ph值。
趁熱將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中。
用棉塞或封口膜蓋住瓶口。
在121-126℃滅菌15-20min。
滅菌后，待壓力歸零后將培養(yǎng)基取出讓其凝固。
二、材料的消毒與接種
1、 材料的選擇和確定
不同種類的植物以及同種植物不同的器官對誘導條件的反應是不一致的，因此，在取材時要充分考慮季節(jié)的影響、器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡、取材的部位以及材料的大小。
2、 材料的消毒
一般材料先用自來水沖洗，再用70%的酒精浸泡數(shù)秒，倒去酒精，再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min，后用無菌水沖洗3-5次。
3、 接種
將材料切成所需的形狀和大小，接入培養(yǎng)基中。
三、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根與移栽
1、 初代培養(yǎng)
在初代培養(yǎng)基上，外植體經(jīng)不同的途徑可以誘導出愈傷組織、直接分化出芽或誘導出胚狀體。
2、 繼代培養(yǎng)
將初代培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上，使愈傷組織分化出叢生芽、不定芽繼續(xù)增殖、胚狀體發(fā)育成完整植株。
3、 生根
將健壯的試管苗插入生根培養(yǎng)基中，誘導根的形成。
4、 試管苗的移栽
打開瓶蓋，逐漸降低濕度，并逐漸增強光照，進行馴化，以適應環(huán)境，經(jīng)過一段時間的煉苗即可移入盆中。