原代細胞體外培養(yǎng)技術中所謂的傳“代”概念并不等于細胞生物學中“親代細胞”與“子代細胞”中“代”的概念。傳代培養(yǎng)的實質(zhì)就是分離后再次培養(yǎng),進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代,傳代數(shù)可以衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。
傳代是細胞分裂造成的結果,細胞從一次分裂結束到下一次分裂結束為一個細胞周期,分為間期與分裂期兩個階段。細胞周期能準確表示細胞增殖速度。兩次細胞分裂之間的時間也可以用細胞世代時間來表示,所以細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間。正常細胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限,只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無限生長下去。
傳代代數(shù)與原代細胞的世代數(shù)(增殖代數(shù))并不是同一個概念。在細胞培養(yǎng)時,所說的“第6代細胞”指細胞已經(jīng)傳代6次。以貼壁細胞為例,每傳代一次,大概要倍增3~6次,細胞要經(jīng)歷如下生長過程:游離期、貼壁期、潛伏期、對數(shù)生長期和停止期(平臺期)。當細胞達到平臺期時,就要進行傳代培養(yǎng),否則細胞會中毒,發(fā)生形態(tài)改變。甚至死亡。
培養(yǎng)細胞有密度依賴和接觸抑制的特點,細胞濃度過低,不易存活,表現(xiàn)為原代細胞在達到增長前有較長的滯留期;細胞濃度過高,發(fā)生接觸抑制后生長遲緩甚至死亡,所以傳代比例通常按1:2~1:4的稀釋度進行。傳代后細胞的接種濃度一般為5×10的5次方/ml。