同科生物flashpfu 高保真dna 聚合酶通過融合特殊持進(jìn)能力增強(qiáng)因子與精心改造過的pfu dna聚合酶，是來源于超嗜熱古細(xì)菌的dna聚合酶。下面小編為大家介紹一下flashpfu dna聚合酶注意事項(xiàng)：
1、請(qǐng)等2× flashpfu pcr buffer (with mg2+)*溶解后再配制pcr反應(yīng)體系。
2、為了獲得較好的擴(kuò)增效果，擴(kuò)增前的所有操作請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行。在室溫下，聚合酶活力可能會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。并且請(qǐng)將flashpfu dna polymerasezui后加入反應(yīng)體系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力導(dǎo)致引物降解。
3、本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆請(qǐng)按照平頭末端克隆方法操作。
4、引物設(shè)計(jì)：
1）引物tm值計(jì)算請(qǐng)使用zui鄰近法（nearest neighbor method）。請(qǐng)不要使用其他計(jì)算方法，它們計(jì)算得到的tm值偏低，不適合本產(chǎn)品。
2）引物長(zhǎng)度控制在20−35堿基，并且tm > 60°c。
3）引物的gc含量控制在40−60%。
4）在引物3’端以g或c結(jié)尾，可提高引物和模板結(jié)合效率。但是要避免3’端避免有多個(gè)g或c，防止非特異性結(jié)合。
5）正、反引物的tm之差不要大于5°c。
6）正、反向引物的3’端避免相互互補(bǔ)。
7）擴(kuò)增長(zhǎng)片段時(shí)，引物長(zhǎng)度控制在25−35堿基。
8）進(jìn)行定點(diǎn)突變時(shí)，請(qǐng)將錯(cuò)配堿基靠近5’端。若錯(cuò)配堿基靠近3’端，可能會(huì)受本酶校正。
不要使用含有*和*的引物。