玉米赤霉烯酮elisa試劑盒試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實驗開始前,將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19(即:1份濃縮洗滌液+19份去離子水)稀釋成工作洗滌液。
1 編 號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
2 加樣反應:加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鐘。
3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
4 顯 色:每孔加入底物液a 50µl,再加底物液b 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應。
6 測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成。