山茶花葉片dna提取及rapd反應(yīng)體系的研究

發(fā)布時(shí)間:2023-08-20
山茶花(camellia japonica l.)是我國特產(chǎn)的名貴花卉之一,由于其品種繁多,在系統(tǒng)分類和品種鑒定上存在一定的難度.本研究針對(duì)山茶花的dna提取方法和rapd擴(kuò)增體系進(jìn)行了摸索,旨在為山茶花在dna水平的分類鑒定和分子生物學(xué)方面研究打下一定的基礎(chǔ).實(shí)驗(yàn)采用改進(jìn)的ctab法提取山茶花葉片dna,得到的dna純度較高,od260/od230值為1.90~2.0,od260/od280值為1.80~1.83,得率也較高,一般在150~200μg·g-1左右,片段完整性較好,大于20kb,符合分子遺傳實(shí)驗(yàn)的要求;在山茶花rapd擴(kuò)增條件的研究中,發(fā)現(xiàn)20μl反應(yīng)體系中加入100ng dna、125 μmol·l-1dntp(each)、1.2μmol·l-1mg2+、1×buffer、0.5μmol·l-1引物、1 u taq酶最為合適,退火溫度一般設(shè)為37℃左右,擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳條帶數(shù)多、清晰、明亮.完成機(jī)構(gòu):浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,金華,321004
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