紫外可見分光光度計(jì)基本工作原理和紅外光譜儀相似,利用一定頻率的紫外可見光照射被分析的有機(jī)物質(zhì),引起分子中價(jià)電子的躍遷,它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長而變化的光譜,反映了試樣的特征。紫外可見光的范圍內(nèi),對(duì)于一個(gè)特定的波長,吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度,因此測(cè)量光譜可以進(jìn)行定性分析,而且根據(jù)吸收與已知濃度的標(biāo)樣的比較,還能進(jìn)行定量分析。
紫外可見分光光度計(jì)是在可見光區(qū)域內(nèi)對(duì)物質(zhì)做定性、定量分析。常見的用途有以下幾種:
(1)比色法蛋白質(zhì)定量
比色法的測(cè)定原理是組成蛋白質(zhì)的氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
(2)核酸的定量
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈dna,以及rna。定量不同類型的核酸,事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。