一、假陰性（無擴增產(chǎn)物）
現(xiàn)象：正對照有條帶，樣品無條帶
可能原因：
· 模板：含有 taq 酶抑制劑、雜蛋白，模板上樣量低或模板降解
· 引物：引物降解，引物設計不合理
· 試劑：酶失活，buffer 不合適
· 反應條件：退火溫度高，延伸時間短
解決方法：
· 純化模板并重新提取，并檢測模板是否含有抑制劑
· 重新設計引物并低溫保存
· 優(yōu)化 buffer，摸索鎂離子濃度或適當加入 dmso（小于 0.3%）
· 提高退火溫度，增加延伸時間（反應條件參照試劑盒說明書）
二、假陽性
現(xiàn)象：空白對照出現(xiàn)條帶
可能原因：
· 引物設計不適，與目的序列具有同源性
· 試劑污染：水、移液槍等被核酸污染
· 樣品間出現(xiàn)交叉污染
解決方法：
· 實驗儀器高壓滅菌
· 實驗試劑（酶除外）高壓滅菌，離心管槍頭一次性使用
· 規(guī)范實驗操作
· 假陽性可通過巢式 pcr 解決，或者使用特異性較高的試劑盒擴增
關(guān)鍵詞：移液槍