1、溫育的溫度：
育常采用的溫度有43、37℃、室溫或4℃等。37℃是實驗室中常用的溫育溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的最適反應(yīng)溫度?？乖贵w反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2 h產(chǎn)物的生成可達(dá)ding峰，為加速反應(yīng)，可在一定范圍內(nèi)提高反應(yīng)的溫度并在反應(yīng)過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率?？乖贵w反應(yīng)在4℃更為徹di，形成的產(chǎn)物更多、更穩(wěn)定，但因所需時間太長，在elisa檢測中一般不予采用。
2、溫育的方式：
溫育方式常采用溫箱法、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結(jié)果的吸光度差異（即“邊緣效應(yīng)”）。可將elisa板置于水浴箱中，板底應(yīng)貼著水面，使溫度迅速平衡，為避免蒸發(fā)，可用塑料貼封紙覆蓋板孔。若用溫箱，elisa板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料（如金屬等），在盒底墊濕的紗布，最后將elisa板放在濕紗布上。溫育過程中每塊反應(yīng)板不能重疊放置，防止溫度擴散的不均勻性。