hplc常見問題和解決方法總匯
壓力異常
操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列表中參考相應的解決方法。
a、 沒有壓力顯示，沒有流動相流動原 因 解決方法
1、電源問題 1、接通電源，開機
2、保險絲被燒壞 2、更換保險絲
3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗 3、a、采取恰當?shù)脑O(shè)定
b、修理或更換控制器
4、柱塞桿折斷 4、更換柱塞桿
5、泵頭內(nèi)有空氣 5、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣
6、流動相不足 6、a、補充流動相
b、更換入口濾頭
7、單向閥損壞 7、更換單向閥
8、漏液 8、擰緊或更換手緊接頭
b、 流動相流動正常，但沒有壓力顯示原 因 解決方法
1、儀表損壞 1、更換儀表
2、壓力傳感器損壞 2、更換壓力傳感器
c、 壓力持續(xù)偏高原 因 解決方法
1、流速設(shè)定過高 1、調(diào)整流速設(shè)定
2、柱前篩板堵塞 2、a、在允許情況下反沖色譜柱
b、更換篩板
c、更換色譜柱
3、流動相使用不當或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀 3、a、使用恰當?shù)牧鲃酉?br>b、沖洗色譜柱
4、色譜柱選擇不當 4、選擇恰當?shù)纳V柱
5、進樣閥損壞 5、清洗或更換進樣閥
6、柱溫過低 6、提高溫度
7、控制器失常 7、修理或更換控制器
8、保護柱阻塞 8、清洗或更換保護柱
9、在線過濾器阻塞 9、清洗或更換在線過濾器
d、 壓力持續(xù)偏低原 因 解決方法
1、流速設(shè)定過低 1、調(diào)整流速
2、系統(tǒng)漏液 2、確定漏液位置并維修
3、色譜柱選擇不當 3、選擇恰當?shù)纳V柱
4、柱溫過高 4、降低溫度
5、控制器失常 5、維修或更換控制器
e、 壓力不斷上升原 因 解決方法
1、見列表c 1、見列表c
f、 壓力降為零原 因 解決方法
1、見列表a、b 1、見列表a、b
g、 壓力不斷下降，但不回零原 因 解決方法
1、見列表d 1、見列表d
h、 壓力波動原 因 解決方法
1、泵中有氣體 1、a、溶劑脫氣
b、從泵中除去氣體
2、單向閥損壞 2、更換單向閥
3、泵密封損壞 3、更換泵密封
4、脫氣不充分 4、a、溶劑脫氣
b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）
5、系統(tǒng)漏液 5、確定漏液位置并維修
6、使用梯度洗脫 6、由于流動相粘度的變化引起的壓力波動
漏 液
通常可以通過擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會導致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密封表面有雜質(zhì)）；損壞的接頭應該更換掉。
a、 接頭處漏液原 因 解決方法
1、接頭松動 1、擰緊
2、接頭磨損 2、更換
3、接頭過緊 3、a、擰松，再重新擰緊
b、更換
4、接頭被污染 4、a、拆下清洗
b、更換
5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件
b、 泵漏液原 因 解決方法
1、單向閥松動 1、a、擰緊單向閥（不必擰的過緊）
b、更換單向閥
2、接頭松動 2、擰緊接頭（不必擰的過緊）
3、混合器密封損壞 3、a、更換混合器密封
b、更換混合器
4、泵密封損壞 4、維修或更換泵密封件
5、壓力傳感器損壞 5、維修或更換壓力傳感器
6、脈沖阻尼器損壞 6、更換脈沖阻尼器
7、比例閥損壞 7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換
b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換
8、放空閥的損壞 8、a、擰緊放空閥
b、更換放空閥
c、 進樣閥漏液原 因 解決方法
1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、重新安裝或更換進樣閥
2、定量環(huán)阻塞 2、更換定量環(huán)
3、進樣口密封松動 3、調(diào)整
4、進樣針頭尺寸不合適 4、使用恰當?shù)倪M樣針
5、廢液管中產(chǎn)生虹吸 5、保持廢液管高于廢液液面
6、廢液管阻塞 6、更換或疏通廢液管
d、 色譜柱漏液原 因 解決方法
1、尾端接頭松動 1、擰緊接頭
2、卡套內(nèi)有填料 2、拆下、清洗卡套、重新安裝
3、篩板厚度不合適 3、使用合適的篩板（參考下表）
篩板選擇指導
物質(zhì)粒徑 篩板孔徑
3-4u 0.5u
5-20u 2u
e、 檢測器漏液原 因 解決方法
1、流通池墊片損壞 1、a、避免過大的背景壓力（壓力降）
b、更換墊片
2、流通池窗破碎 2、更換窗口
3、手緊接頭漏液 3、擰緊或更換
4、廢液管阻塞 4、更換廢液管
5、流通池阻塞 5、重新安裝或更換
液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。
a、 峰拖尾原 因 解決方法
1、篩板阻塞 1、a、反沖色譜柱
b、更換進口篩板
c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷 2、填充色譜柱
3、干擾峰 3、a、使用更長的色譜柱
b、改變流動相或更換色譜柱
4、流動相ph選擇錯誤 4、調(diào)整ph值。對于堿性化合物，低ph值更有利于得到對稱峰
5、樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應圖 5、a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑
b、更改色譜柱
b、 峰前延原 因 解決方法
1、柱溫低 1、升高柱溫
2、樣品溶劑選擇不恰當 2、使用流動相作為樣品溶劑
3、樣品過載 3、降低樣品含量
4、色譜柱損壞 4、見a1、a2
c、 峰分叉原 因 解決方法
1、 保護柱或分析柱污染
圖 1、取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶于流動相 2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
d、 峰變形原 因 解決方法
1、樣品過載 1、減少樣品載量
e、 早出的峰變形原 因 解決方法
1、樣品溶劑選擇不恰當 1、a、減少進樣體積
b、運用低極性樣品溶劑
f、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因 解決方法
1、柱外效應 1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）
b、使用小體積的流通池
g、 k’增加時，脫尾更嚴重原 因 解決方法
1、二級保留效應，反相模式 1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）
b、加入乙酸（或酸性樣品）
c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）
d、更換一支柱子
2、二級保留效應，正相模式 2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）
b、加入乙酸（或酸性樣品）
c、加入水（或多官能團化合物）
d、試用另一種方法
3、二級保留效應，離子對 3、加入三乙胺（或堿性樣品）
h、 酸性或堿性化合物的峰拖尾原 因 解決方法
1、緩沖不合適 1、a、使用濃度50-100mm的緩沖液
b、使用pka等于流動相ph值的緩沖液
i、 額外的峰原 因 解決方法
1、樣品中有其他組份 1、正常
2、前一次進樣的洗脫峰 2、a、增加運行時間或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰 3、a、檢查流動相是否純凈
b、使用流動相作為樣品溶劑
c、減少進樣體積
j、 保留時間波動原 因 解決方法
1、溫控不當 1、調(diào)好柱溫
2、流動相組分變化 2、防止變化（蒸發(fā)、反應等）
3、色譜柱沒有平衡 3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱
k、 保留時間不斷變化原 因 解決方法
1、流速變化 1、重新設(shè)定流速
2、泵中有氣泡 2、從泵中除去氣泡
3、流動相選擇不恰當 3、a、更換合適的流動相
b、選擇合適的混合流動相
l、 基線漂移原 因 解決方法
1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
圖
2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。） 2、使用hplc級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體 3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1n的硝酸。（不要用鹽酸）
4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線） 4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當或流速變化 5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時 6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。
7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 7、檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學試劑及hplc級的溶劑
8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高k’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。 8、使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。 9、重新設(shè)定基線。當檢測器動力學范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。
10、檢測器沒有設(shè)定在吸收波長處。 10、將波長調(diào)整至吸收波長處
m、 基線噪音（規(guī)則的）原 因 解決方法
1、在流動相、檢測器或泵中有空氣 1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液
圖 2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動相混合不* 3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱） 4、減少差異或加上熱交換器
5、在同一條線上有其他電子設(shè)備 5、斷開lc、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。
6、泵振動 6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器
n、 基線噪音（不規(guī)則的）原 因 解決方法
1、 漏液
圖 1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。
2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成 2、檢查流動相的組成。
3、流動相各溶劑不相溶 3、選擇互溶的流動相
4、檢測器/記錄儀電子元件的問題 4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。
5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 5、用強極性溶液清洗系統(tǒng)
6、檢測器內(nèi)有氣泡 6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器
7、流通池污染（即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。） 7、用1n的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
8、檢測器燈能量不足 8、更換燈
9、色譜柱填料流失或阻塞 9、更換色譜柱
10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常 10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置
o、 寬峰原 因 解決方法
1、流動相組成變化 1、重新制備新的流動相
2、流動相流速太低 2、調(diào)節(jié)流速
3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間） 3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
4、檢測器設(shè)定不正確 4、調(diào)整設(shè)定
5、柱外效應影響
a、柱子過載
b、檢測器對反應時間或池體積響應過大
c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大
d、記錄儀響應時間太長
圖 5、
a、 小體積進樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品
b、減少響應時間或使用更小的流通池
c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路
d、減少響應時間
6、緩沖液濃度太低 6、增加濃度
7、保護柱污染或失效 7、更換保護柱
8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低 8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
9、柱入口塌陷 9、打開柱入口，*塌陷或更換柱子
10、呈現(xiàn)兩個或多個未被*分離的物質(zhì)的峰 10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果
11、柱溫過低 11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75℃
12、檢測器時間常數(shù)太大 12、使用較小的時間常數(shù)
p、 分離度降低原 因 解決方法
1、流動相污染或變質(zhì)（引起, 保留時間變化） 1、重新配置流動相
2、保護柱或分析柱阻塞
圖 2、去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
q、 所有的峰面積都太小原 因 解決方法
1、檢測器衰減設(shè)定過高 1、減少衰減的設(shè)定
2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大 2、設(shè)定較小的時間常數(shù)
3、進樣量太少 3、增大進樣量
4、記錄儀連接不當 4、使用正確的連接
r、 所有的峰面積都太大原 因 解決方法
1、檢測器衰減設(shè)定過低 1、采取較大的衰減
2、進樣過多 2、減少進樣量
3、記錄儀連接不正確 3、正確連接記錄儀
以下問題在使用進樣閥過程中有可能發(fā)生。
a、 手動進樣閥，轉(zhuǎn)動不靈原 因 解決方法
1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封
2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度
b、 手動進樣閥，載樣困難原 因 解決方法
1、進樣閥安裝不當 1、重新安裝
2、定量環(huán)阻塞 2、清洗或更換定量環(huán)
3、進樣器污染 3、清洗或更換進樣器
4、管路阻塞 4、清洗或更換管路
c、 自動進樣閥，不能轉(zhuǎn)動原 因 解決方法
1、無壓力（或電源） 1、提供恰當?shù)膲毫Γ娫矗?
2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度
3、進樣閥安裝不當 3、重新安裝
d、 自動進樣閥，其它問題原 因 解決方法
1、阻塞 1、清洗或更換阻塞部件
2、機械故障 2、見隨機維修手冊
3、控制器故障 3、維修或更換控制器
由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題
你需要運用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你養(yǎng)成習慣，每天花上幾分鐘運用你的感官（除了味覺）來“感覺”你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。
a、 溶劑的氣味原 因 解決方法
1、漏液 1、見section 3
2、濺出 2、a、檢查廢液瓶是否已滿
b、找到濺出的部位并清洗干凈
b、 熱氣味原 因 解決方法
1、儀器過熱 1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風設(shè)施
b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定
c、關(guān)掉儀器，查找維修手冊
c、 讀數(shù)不正常原 因 解決方法
1、壓力不正常 1、見section 2
2、柱溫箱問題 2、
a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定
b、參照用戶手冊
3、檢測器燈失效 3、更換燈
d、 燈警告原 因 解決方法
1、壓力超出極限值 1、
a、檢查是否阻塞
b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定
2、其它警示燈 2、見用戶手冊
e、 警告音原 因 解決方法
1、溶劑泄漏/濺出 1、找到并解決
2、其它警告音 2、見用戶手冊
f、 刺耳的短音或長音原 因 解決方法
1、軸承失效 1、見用戶手冊
2、潤滑不夠 2、進行恰當?shù)臐櫥?
3、機械故障 3、見用戶手冊
常見故障及日常維護
下表中列出了液相色譜常見的一些問題，右側(cè)中則列出的日常維護的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號中的數(shù)字是建議進行維護的時間間隔。用戶手冊則提供您更多的維護方法。
溶劑瓶
問 題 維 護
1、進口篩板阻塞 1、
a、更換（3-6個月）
b、過濾流動相，0.5u濾膜
2、氣泡 2、流動相脫氣
泵
問 題 維 護
1、氣泡 1、流動相脫氣
2、泵密封損壞 2、更換（3個月）
3、單向閥損壞 3、過濾流動相，運用在線過濾，準備備用單向閥
進樣閥
問 題 維 護
1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、
a、不要擰的過緊
b、過濾樣品
色譜柱
問 題 維 護
1、篩板阻塞 1、a、過濾流動相
b、過濾樣品
c、運用在線過濾或保護柱
2、柱頭塌陷 2、a、避免使用ph>8的流動相（針對大部分硅膠的柱子）
b、使用保護柱
c、使用預柱（飽和色譜柱）
檢測器
問 題 維 護
1、燈失效，檢測器響應降低，噪音增大 1、更換（6個月）或準備備用燈
2、流通池有氣泡 2、a、保持流通池清潔
b、池后使用反壓抑制器
c、流動相脫氣
一般
問 題 維 護
1、腐蝕/摩擦損壞 1、在不使用時保持系統(tǒng)緩沖液的清潔
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