科研狗起早摸黑做了幾天分子克隆實驗，
本想著拖了好幾個星期的實驗終于要做完啦！瞬間覺得自己棒棒噠！
但是最后看實驗結果?。?！原地裂開
排查實驗試劑，沒問題！
排查實驗操作，沒問題！
排查儀器，沒問題！
那么問題到底出在哪呢？
其實問題有可能出現在樣本保存與前處理步驟中哦。生物樣本中的核酸(dna/rna)會因為核酸酶、溫度、ph值、微生物、自身化學性質等因素而發(fā)生被動或主動降解，從而導致分子實驗結果不盡人意。目前針對不同科研的需求，更多的樣本保存方式也相繼問世，小愛為大家匯總了各類樣本保存的步驟、注意事項、以及樣本保存耗材或保存液的推薦。
一、實驗樣本主要類型：
分子實驗中主要的樣本類型有：純核酸類、組織類、細胞類及環(huán)境類。不同樣本具有不同的保存方式以及操作注意事項。
圖1常見的實驗樣本類型
表1不同類型樣本核酸保存方法及穩(wěn)定性
類型
檢測目標
穩(wěn)定性及保存注意事項
組織
dna/rna
新鮮組織應盡快加入到含有核酸保護劑的管中，放置于冰上運輸至實驗室；石蠟包埋組織中的核酸在室溫即可保持穩(wěn)定。
血液
全血的dna/rna
dna：全血室溫可穩(wěn)定保存24h，2-8℃穩(wěn)定保存72h，-20℃可長期保存
rna：室溫不建議保存，樣本應至于含有核酸穩(wěn)定劑的管中，放置于冰上運輸至實驗室。
血清/血漿的cfdna/ctdna/病毒dna/病毒rna
cfdna：2-8℃，8h內分離血漿，-20℃或更低溫度穩(wěn)定保存；
ctdna：抽血后4-5h內即需要完成核酸提?。?br>病毒dna：2-8℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定一年以上；
病毒rna：2-8℃，6h內分離血漿，-20℃或更低溫度保存
干血片的dna
室溫穩(wěn)定保存19個月，需要注意防潮。
細胞
dna/rna
37℃保持細胞活力即可。
骨髓
rna
必須在采集后立即至于rna穩(wěn)定劑中，或者于液氮中速凍
胸水、腦水、腦脊液等其他生物體液樣本
dna
低溫（2-8℃）保存，盡快提取檢測。
二、實驗樣本前處理步驟及注意事項
1、組織樣本：
塊狀組織樣本短時間內無法充分裂解，一般需要進行樣本預處理。組織取材在組織離體30min內完成，取樣的動作要盡量快速利索，將組織按任一方向切成黃豆粒大小。
組織dna提?。盒迈r組織樣本用生理鹽水清洗2次，即刻進行實驗。如若不立即進行實驗，可用液氮速凍，-80℃凍存。
組織rna提?。簩游锘蛑参锝M織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理,快速轉入裝有1ml trizol(abs60154)的2ml離心管中，立即進行實驗。若后期再進行實驗，盡量保存時將樣本浸入rna樣品保存液(abs9268)后置4℃冰箱過夜（4℃過夜是必需的，這樣可使rna樣品保存液滲入到組織中），然后轉移到-20℃冰箱?；蛘咭旱心ソM織，加入trizol，放入-80℃保存。
圖2組織樣本rna提取流程圖
2、細胞樣本：
dna提取：細胞收集沉淀后，進行液氮速凍，-80℃保存。
rna提?。?br>1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10cm2培養(yǎng)面積加入1ml trizol，用加樣器吹打數次，以確保細胞裂解，然后轉移至離心管中。注：貼壁細胞trizol的使用量應由培養(yǎng)皿表面積決定，而非由細胞數目決定。trizol量不足可能導致提取的rna中有dna污染；
2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每5-10×106動植物或酵母細胞，或每1×107細菌細胞加入1ml trizol，用加樣器吹打，使其裂解，然后轉移至離心管中。 注：添加trizol前切勿洗滌細胞，以免rna降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞。若后期再進行rna提取實驗，細胞用液氮速凍，-80℃凍存。
3、血液樣本：
采用含有抗凝劑的真空采血管保存即可。但采血管中的抗凝劑種類多樣，抗凝劑的種類也會直接影響后續(xù)檢測結果，面對這么多的采血管如何進行選擇？我們建議使用edta或枸櫞酸鈉抗凝管，不建議使用肝素抗凝管（因肝素在后面的核酸提取過程中很難去除，且肝素對pcr反應有很強的抑制作用，因此不建議使用肝素抗凝管）。采集完血液，顛倒混勻備用。另外冰凍血液溶解過程中會有破碎的細胞釋放rna酶，因此在冰凍前加入trizol，切勿直接凍存新鮮血液，保存好的血液應避免反復凍融。
4、血清/血漿樣本：
全血不加抗凝劑分離的上清是血清，加入抗凝劑分離的上清是血漿。取全血后，靜止1-2h，置于離心機3000rpm離心15min即可獲得血清或血漿。
三、樣本前處理利器—rna樣品保存液(abs9268)
rna樣品保存液是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液，能使細胞內的rna與rna酶分離，防止樣本中rna表達譜發(fā)生變化。加入樣本保存液的樣本中rna在室溫可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃標本可以長期保存。在rna樣品保存液中保存的標本，反復凍融至室溫20次不影響rna的質量。
操作步驟：
1）計算保存液用量：根據要保存的各樣本的體積，計算出所需rna樣品保存液用量；a：rna樣品保存液的用量應當是組織體積的10倍(100mg組織約用1ml rna樣品保存液)；b：離心收集2×107細胞rna樣品保存液的用量是1ml；
2）分裝：將rna樣品保存液按需要量分裝入自備保存管中；
3）切片：快速將較大的組織切成厚度＜0.5cm的任意片狀，較小的組織直接取下，立即浸入rna樣品保存液中；
4）保存：保存時先將樣本浸入rna樣品保存液后置4℃冰箱過夜，然后轉移到-20℃冰箱或繼續(xù)轉移至-80℃冰箱。
四、本期小愛產品推薦
貨號
產品名稱
規(guī)格
abs9268
rna樣品保存液
100ml
abs9474
組織保存液
100ml
abs60150
rna酶抑制劑
2000u
abs60154
trizol
100ml
abs9259
無酶無菌水(depc水)
500ml
absin特色產品線：
wb相關：ecl發(fā)光液、預染marker、預制膠；ihc相關：二抗試劑盒、組化筆；ip/coip試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、bsa、蛋白酶k、ctb、ttx、cee；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；elisa試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體；定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...