今年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予美國(guó)科學(xué)家卡塔林·卡里科（katalin karikó）和德魯·魏斯曼（drew weissman），表彰他們?cè)诤塑諌A基修飾方面的發(fā)現(xiàn)，從而開發(fā)出有效的mrna疫苗。mrna疫苗作為一種新型疫苗，不僅在新冠中有突出的貢獻(xiàn)，同樣有益于其他疾病，尤其是傳染性疾病的預(yù)防上。小優(yōu)整理了二位科學(xué)家在近年來mrna疫苗的開發(fā)中使用的關(guān)鍵試劑，讓大家有更好的選擇。
一、無內(nèi)毒素質(zhì)粒純化試劑盒drew weissman在研究中一直選擇來自qiagen的endofree plasmid kit，他關(guān)注于質(zhì)粒的產(chǎn)品、純度、內(nèi)毒素以及超螺旋占比，對(duì)后續(xù)的ivt效率有較大的影響，多次發(fā)表在vaccine、nature、science advances等雜質(zhì)中[1,2,3]。
二、病毒rna純化試劑盒qiaamp viral rna mini kit為新冠研究中的明星試劑盒，被who和中國(guó)cdc推薦為病毒rna純化的第一選擇試劑，其du特的回收柱有高達(dá)90%的回收率，同樣有96孔板高通量形式，適合多種的應(yīng)用場(chǎng)景[3]。
三、mrna純化/回收試劑盒作為mrna疫苗生產(chǎn)的關(guān)鍵步驟之一，mrna的加帽率較為重要，純化效率是mrna疫苗中的關(guān)鍵一環(huán)，katalin karikó發(fā)表在pharmaceutics雜志上題為 “ribozyme assays to quantify the capping efficiency of in vitro-transcribed mrna” 的一篇文章中，設(shè)計(jì)了一種核酶介導(dǎo)的加帽效率測(cè)定方法，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其加帽效率測(cè)定方法優(yōu)于傳統(tǒng)方法。使用了qiagen基于硅膠模柱分級(jí)純化方案，即qiagen rneasy mini kit。該試劑盒中的硅膠模純化柱可以在不同的緩沖液條件下，結(jié)合不同長(zhǎng)度的rna片段。最后，將硅膠柱純化得到的短5'切割產(chǎn)物和核酶用21% page+8m尿素或者lc-ms進(jìn)行定量分析和可視化，得出不同方法的結(jié)果比較。具體流程如下[4]。
四、蛋白純化試劑qiagen的ni產(chǎn)品一直備受青睞，2022年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主carolyn r.bertozzi，morten meldal 和k.barry sharpless也多次使用ni-nta產(chǎn)品，其四價(jià)螯合比ni-ida 3價(jià)螯合獲得的純化更高，一次純化即可得到95%純化蛋白，結(jié)合量克搞到50mg蛋白/ml樹脂。drew weissman同樣使用qiagen的ni產(chǎn)品并發(fā)表在頂級(jí)雜質(zhì)上[5,6,7,8,9]。
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參考文獻(xiàn)：#1：anti-pfgarp activates programmed cell death of parasites and reduces severe malaria#2：tick immunity using mrna, dna and protein-based salp14 delivery strategies#3：immunogenicity and protective efficacy of sars-cov-2 mrna vaccine encoding secreted non-stabilized spike in female mice#4：ribozyme assays to quantify the capping efficiency of in vitro-transcribed mrna#5：mrna-lnp expressing pfcsp and pfs25 vaccine candidates targeting infection and transmission of plasmodium falciparum#6：mrna vaccination induces tick resistance and prevents transmission of the lyme disease agent#7：in vivo adenine base editing of pcsk9 in macaques reduces ldl cholesterol levels#8：a multi-targeting, nucleoside-modified mrna influenza virus vaccine provides broad protection in mice#9：sars-cov-2 mrna vaccines foster potent antigen-specific germinal center responses associated with neutralizing antibody generation
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