肌氨酸氧化酶(sarcosineoxidase,sox)酶學(xué)編號ec1.5.3.1,它是肌肉代謝產(chǎn)物肌酐的降解中的第三個酶,肌酐最終降解為*、甲醛和過氧化氫。在ivd領(lǐng)域sox被作為一種重要的診斷酶制劑。
肌氨酸氧化酶在體外診斷領(lǐng)域的應(yīng)用是基于它的催化原理,可偶聯(lián)肌酐酶(肌酐亞氨基水解酶)和肌酸酶(肌酸脒基水解酶crh)將肌酐降解為*、甲醛和過氧化氫。肌酐的水平是判斷腎臟功能的一個重要參考指標(biāo),因此它在醫(yī)藥領(lǐng)域也具有良好的應(yīng)用前景。
生化檢測原料肌氨酸氧化酶
肌氨酸氧化酶的酶活:
以肌氨酸為底物,取50μl不同濃度的sox酶液,分別加人3ml顯色液于1mmo1/l的4-氨基*、6mmo1/l的*、7000u/l的辣根過氧化物酶、20mmo1/l的tris-hc1緩沖液(ph8.0)中,混勻后加人150μl肌氨酸(0.2mo1/l),振蕩混勻,于37℃水浴反應(yīng)5min,結(jié)束后沸水浴煮沸3min終止反應(yīng),冷卻,于500nm下測定吸光度。酶活單位定義為:在37℃下,每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol肌氨酸產(chǎn)生甲醛所需的酶量定義為1個酶活單位(u)。
肌氨酸氧化酶的純化:
從固體平板挑取單菌落,接人種子培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)過夜。按照體積分數(shù)5%的接種量接人發(fā)酵培養(yǎng)基,37℃,200r/min,培養(yǎng)至0d6000.6-0.8后,采用1mmo1/l的iptg誘導(dǎo)8h。菌液破壁離心后,取酶上清液進行純化,純化后的酶液置于4℃保存?zhèn)溆谩?br>肌氨酸氧化酶的最適反應(yīng)溫度:
在ph8.0、20mmo1/ltris-hc1緩沖液體系中,在20-80℃范圍內(nèi)測定不同溫度下的酶活力,觀察溫度對酶活性的影響,以確定酶的最適反應(yīng)溫度;
肌氨酸氧化酶的最適ph值:
在不同ph的反應(yīng)體系(ph4.0-11.0)中測定s0x的酶活力,以酶活力高的記為100%,計算其他ph條件下的相對酶活力,確定酶促反應(yīng)的最適ph。不同ph的緩沖液體系為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ph4.0-5.0),磷酸-磷酸鉀緩沖液(ph6.0-7.0),tris-hc1緩沖液(ph8.0-9.0),*-na0h緩沖液(ph10.0-11.0)。
肌氨酸氧化酶可以與色原底物tops、過氧化物酶等試劑一起用于血清中肌酐水平的測定,德晟提供的有包括酶制劑括sox、crh,色原底物,緩沖劑等在內(nèi)的多種試劑盒原料。