細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測(cè)原理！
鐵是人體必需的元素之一，對(duì)人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就 會(huì)造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和 肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵 3～5 克，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，極少部分以離子的 形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子，線性范圍 5~300um。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空 白對(duì)照，本試劑盒可進(jìn)行 100 個(gè)樣品的檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測(cè)試劑盒
規(guī)格：100t
儲(chǔ)存：4℃保存
有效期：6個(gè)月
實(shí)驗(yàn)步驟：
樣品準(zhǔn)備（以 24 孔板為例）： 將含鐵元素 dmem 培養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞用冷的 pbs 2ml 洗兩遍，將 pbs 吸棄（若不馬上檢測(cè)可將其凍存于 -20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解 2h。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將 3mm 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 um、150um、75um、 37.5um、18.75um、9.38um、4.69um。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。
將緩沖液與 4.5%高錳酸鉀溶液按 1:1 混勻，稱為混液 a。 注意：高錳酸鉀溶液需要自備。
參考下表使用 1.5ml 離心管，設(shè)置空白對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過(guò)高， 用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
空白對(duì)照 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品 裂解的樣品
稀釋用液 100μl －
混液 a 100μl 100μl 100μl
樣品 － － 100μl
標(biāo)準(zhǔn)品工作液 － 100μl －
5. 混勻，60℃ 孵育 1h。
6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。
7. 加入 30ul 鐵離子檢測(cè)劑，混勻，室溫孵育，30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 測(cè)定吸光度。如果不能測(cè)定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范圍內(nèi)檢測(cè)。
9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算鐵離子濃度。
注意事項(xiàng)：
1.操作過(guò)程中，樣品與試劑等避免與鐵器接觸，以防污染。
2.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作，檢測(cè)試劑有腐蝕性，請(qǐng)小心操作，若不慎沾到 皮膚上請(qǐng)馬上用清水沖洗干凈。
3.本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！