1.型號：lc-10at產(chǎn)地日本島津
lc-10at液相色譜儀是日本島津公司1996年的產(chǎn)品,檢測器為可變波長紫外檢測器,色譜柱為島津公司的ods-c18。
2.用途：
液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，hplc所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于hplc具有高分辨率、高靈敏度、速度快、可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。
3.測定原理
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運(yùn)動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
4.使用方法
4.1系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由1個lc-10atvp溶劑輸送泵、rheodyne7725i手動進(jìn)樣閥、spd-10avp紫外-可見檢測器、色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、不間斷電源等輔助設(shè)備。
4.2準(zhǔn)備
4.2.1準(zhǔn)備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲波脫氣20min。
4.2.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。
4.2.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時配制），用合適的0.45μm濾膜過濾。
3.2.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常，特別注意輸液管道內(nèi)是否有氣泡。
4.3開機(jī)：接通電源，依次開啟不間斷電源、溶劑輸送泵、先將機(jī)器預(yù)熱半小時，這時的流動相用85％甲醇溶液（已脫氣），而且要時刻注意輸液管道內(nèi)是否有氣泡，如有氣泡要進(jìn)行排氣。預(yù)熱半小時后，開啟檢測器，待檢測器自檢結(jié)束后，打開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，zui后打開色譜工作站。
4.4各種參數(shù)設(shè)定
4.4.1波長設(shè)定：在檢測器顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長值，按[enter]鍵確認(rèn)。按[ce]鍵退出到初始屏幕。
4.4.2流速設(shè)定：在輸送泵顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按[enter]鍵確認(rèn)。按[ce]鍵退出。
4.5更換流動相并排氣泡
4.5.1將輸送管道的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動相的儲液瓶（已排氣）中；
4.5.2逆時針轉(zhuǎn)動泵的排液閥180度，打開排液閥；
4.5.3按泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以2ml/min的流速沖洗，3min（可設(shè)定）后自動停止；
4.5.4將排液閥順時針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。
4.5.5如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。
4.5.6如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按[pump]鍵，沖洗3min后再按[pump]鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。
4.6平衡系統(tǒng)
4.6.1按《大連江申色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程》打開“在線色譜工作站”軟件，輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，按下“數(shù)據(jù)收集”頁的[查看基線]按鈕。
4.6.2等度洗脫方式
4.6.2.1按輸送泵的[pump]鍵，泵啟動，pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的沖洗系統(tǒng)，一般zui少需6倍柱體積的流動相。
4.6.2.2檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
4.6.2.3觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)不超過1mpa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按3.5操作。
4.6.2.4觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mv/min，噪聲為<0.001mv時，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。
4.7測定步驟
4.7.1計(jì)算校正因子
4.7.1.1用編輯∈實(shí)驗(yàn)參數(shù)編輯實(shí)驗(yàn)參數(shù)在編輯實(shí)驗(yàn)參數(shù)時，紀(jì)錄圖譜名要按照校正文件名的格式輸入xxxx0101.
4.7.1.2用編輯∈積分定量參數(shù)對話框，選擇單點(diǎn)外標(biāo)法
4.7.1.3用編輯∈報(bào)告參數(shù)對話框編輯好相應(yīng)的參數(shù)，選擇校正實(shí)驗(yàn)檢查框
4.7.1.4用編輯∈校正∈校正實(shí)驗(yàn)參數(shù)對話框編輯相應(yīng)的校正參數(shù)及方式，校正文件名前綴必須與編輯∈實(shí)驗(yàn)參數(shù)的文件名前4位一致
4.7.1.5用編輯∈校正編輯定量峰表對話框編輯需要的校正的色譜峰的保留時間、樣品名、每點(diǎn)的含量、峰標(biāo)志及誤差，編輯完成后確認(rèn)，以后∈校正∈計(jì)算校正因子命令利用定量峰表進(jìn)行峰的匹配及計(jì)算。
4.7.1.6用∈操作∈數(shù)據(jù)采集功能進(jìn)行求校正因子的實(shí)驗(yàn)，將標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣，進(jìn)樣前按檢測器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中[零點(diǎn)校正]按鈕校正基線零點(diǎn)，再按一下[查看基線]按鈕使其彈起。
4.7.1.7用∈操作∈峰檢測功能對圖譜進(jìn)行峰檢測，完成后用∈操作∈校正∈計(jì)算校正因子及繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.7.2進(jìn)樣
4.7.2.1進(jìn)樣前按檢測器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中[零點(diǎn)校正]按鈕校正基線零點(diǎn)，再按一下[查看基線]按鈕使其彈起。用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量
4.7.2.2進(jìn)行樣品分析，用∈操作∈數(shù)據(jù)采集對進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，并把編輯∈報(bào)告參數(shù)把校正文件名填入校正文件名編輯框，然后進(jìn)測定樣。
4.7.2.3用∈操作∈峰檢測，對采集的色譜峰進(jìn)行檢測，之后工作站自動裝入外標(biāo)因子文件，計(jì)算出含量。
4.7.2.4打印報(bào)告
用∈打印∈打印分析報(bào)告，打印機(jī)輸出分析報(bào)告。
4.8關(guān)機(jī)
樣品測定結(jié)束后，將檢測器關(guān)機(jī)，將輸送管道的吸濾器放入裝有85％甲醇溶液（已脫氣）的儲液瓶，進(jìn)行測定系統(tǒng)清洗，半小時后關(guān)機(jī)。
5.注意事項(xiàng)
5.1流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purge鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進(jìn)入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。
原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。
處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵,清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。
5.2柱壓高原因（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi);（2）樣品污染沉積。
處理對于*種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的c18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定）,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
5.3既無壓力指示,又無液體流過
原因（1）泵密封墊圈磨損;（2）大量氣泡進(jìn)入泵體。
處理對于*種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
5.4壓力波動大,流量不穩(wěn)定.
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。
處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣[2>。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗.
5.5出峰不佳,峰分叉。
原因（1）色譜柱被污染;（2）柱頭填料塌陷。
處理對于*種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定）,再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料）,裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平[2>。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。
5.6峰面積重復(fù)性不佳。
原因（1）進(jìn)樣閥漏液;（2）加樣針不到位。
處理對于*種情況更換進(jìn)樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從load狀態(tài)轉(zhuǎn)換到inject狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中,的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機(jī)鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),*溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
氮吹儀固相萃取儀抑菌圈測定儀化學(xué)試劑色譜柱純水機(jī)
來源成都雅源科技