圓二色光譜研究蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)、構(gòu)象變化以及其他手性化合物結(jié)構(gòu)的常用方法，用圓二色光譜檢測蛋白質(zhì)二級構(gòu)象的操作方法是研究人員都需要掌握的。下面就簡單介紹一下應(yīng)該如何操作圓二色光譜儀。
1.準(zhǔn)備
為避免圓二色光譜儀強(qiáng)度隨溫度而發(fā)生變化的變化，應(yīng)安裝在空調(diào)室中，而且還需要光源(xe燈)的冷卻用水(流量為2.0l/min)
為了防護(hù)由氙燈所產(chǎn)生的臭氧化光學(xué)系統(tǒng)的腐蝕,還得需要流動干燥的氮?dú)?2-5l/min)
需要透光率好、應(yīng)變小的高品質(zhì)石英玻璃樣品池。
2.樣品制備
樣品制備需要保證蛋白的純度和透明度，避免含有光吸收的雜質(zhì)。
緩沖液可選擇透明度較高的溶液。
3.開機(jī)
打開高純氮?dú)?，通入光路。打開計(jì)算機(jī)，進(jìn)入操作界面，設(shè)置相關(guān)參數(shù)開啟氙燈，等約30min，待儀器充分預(yù)熱后，方可使用。
4.測試
將光路徑為1cm的樣品池放入樣品室中，進(jìn)入測試界面，輸入測試參數(shù)：靈敏度1000mdeg；掃面范圍350-200nm；掃速50nm/min；響應(yīng)時(shí)間2s；響應(yīng)波長寬度1.0nm；掃描次數(shù)1次。先測試蒸餾水背景，再分別測試配制的兩份溶液。然后進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
5.關(guān)機(jī)
打開樣品室，取出樣品池；退出操作界面，關(guān)閉氙燈；關(guān)閉氮?dú)?，關(guān)閉主機(jī)電源；關(guān)閉計(jì)算機(jī)和打印機(jī)；清洗樣品池。