雙縮脲法蛋白含量測試盒?操作過程

發(fā)布時間:2024-07-17
雙縮脲法蛋白含量測試盒操作過程:
一、粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。2.血清或培養(yǎng)液:直接測定。 3.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
二、測定操作: 1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到680nm,蒸餾水調(diào)零。2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。 3.對照管:取一支ep管,加入100μl粗酶液,200μl試劑二,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μl試劑三,混勻后8000g,4℃離心10min;取200μl上清液,加入新的ep管,再加入1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為a對照管。 4.測定管:取一支ep管,加入100μl粗酶液,200μl試劑三,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μl試劑二,混勻后8000g,4℃離心10min;取200μl上清液,加入新的ep管,再加入1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為a測定管。(注意與空白管不同,先加試劑三,后加試劑二) 5.空白管:取ep管,加入200μl蒸餾水,1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為a空白管。 6.標(biāo)準(zhǔn)管:取ep管,加入200μl標(biāo)準(zhǔn)品,1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為a標(biāo)準(zhǔn)管。注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。
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