abts自由基清除能力檢測(cè)試劑盒（微量法）
產(chǎn)品貨號(hào)：ba1868
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
abts法可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測(cè)定，是使用泛的間接檢測(cè)方法。abts經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽(yáng)離子abts自由基，在405nm或734nm處有最大吸收峰。被測(cè)物質(zhì)加入abts自由基溶液后，所含抗氧化成分能與abts自由基發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色，405nm的吸光度下降，在一定范圍內(nèi)其吸光度的變化與自由基被清除的程度成正比。本試劑盒中，通過(guò)測(cè)定吸光度下降的程度來(lái)反映樣本清除abts自由基的能力。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
產(chǎn)品組成：
試劑名稱
規(guī)格
保存條件
提取液
液體80ml×1瓶
2-8℃
試劑一
液體40ml×1瓶
2-8℃
試劑二
粉劑×1瓶
2-8℃
試劑三
液體20µl×1支
2-8℃
試劑四
液體1.5ml×1支
-20℃
試劑五
粉劑×1支
2-8℃
溶液的配制：
1.試劑二：臨用前加入1ml蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑可分裝后保存，-20℃可保存四周，避免反復(fù)凍融；
2.試劑三工作液的配制：液體置于試劑瓶?jī)?nèi)ep管中。臨用前根據(jù)樣本量按試劑三（µl）：蒸餾水（ml）=1µl:12ml 的比例配成試劑三工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，盡量在4h之內(nèi)用完；
3.試劑四工作液的配制：可先將試劑四-20℃分裝保存。臨用前根據(jù)樣本量按試劑四：試劑一（v:v）=1:9的比例配成試劑四工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用，現(xiàn)配現(xiàn)用，用不完的試劑放于-20℃可保存兩周。
4.試劑五：粉劑置于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃瓶中，含有5mg維生素c。臨用前加入2.8ml提取液，充分振蕩溶解； 配成10mmol/l維生素c溶液，用于陽(yáng)性對(duì)照。2-8℃可保存兩周。
5.abts工作液的配制：臨用前根據(jù)樣本量按試劑一：試劑二：試劑三工作液（v:v:v）=76:5:4的比例配成abts工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配，室溫避光保存，務(wù)必在30分鐘內(nèi)使用。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、研缽/粉碎機(jī)、烘干箱、30~50 目篩、冰、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可參考文獻(xiàn)）
1.植物組織樣本的制備：將新鮮樣本置于60℃烘箱烘干至恒重，研缽研碎（或粉碎機(jī)粉碎），過(guò)30~50目篩；稱取約0.05g樣本，加入1ml提取液后置于40℃水浴鍋中浸提30min；10000rpm室溫離心10min，取上清，置于冰上待測(cè)。
2.紅酒、果汁等液體樣本：吸取100µl樣本溶液加入900µl提取液，旋渦振蕩混勻，室溫10000rpm離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3.提取物或者藥物：可用提取液配制成一定濃度，如5mg/ml。
注意：不同樣本清除abts自由基的能力可能相差很大，為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，樣本要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整（如清除率大于90%，建議將提取的樣本用提取液進(jìn)行稀釋；清除率小于5%，建議加大烘干樣本質(zhì)量或液體樣本體積進(jìn)行提?。?
二、測(cè)定步驟
1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。
2.陽(yáng)性對(duì)照的準(zhǔn)備：若需要線性關(guān)系，建議將10mmol/l的維生素c溶液用提取液配制成1、0.8、0.6、0.4、 0.2、0.1mmol/l的維生素c溶液待用，稀釋可參考下表；若需要清除率約為90%的陽(yáng)性對(duì)照，則建議將10mmol/l維生素c溶液用提取液配制成大于1mmol/l的維生素c溶液待用。
序號(hào)
稀釋前濃度（mmol/l）
維生素 c 溶液體積（µl）
提取液體積（µl）
稀釋后濃度（mmol/l）
1
10
100
900
1
2
1
160
40
0.8
3
1
120
80
0.6
4
1
80
120
0.4
5
1
40
160
0.2
6
1
20
180
0.1
備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需10µl維生素c溶液。
3.操作表：在96孔板或ep管中分別加入下列試劑：
試劑名稱（μl）
空白管
測(cè)定管
對(duì)照管
陽(yáng)性對(duì)照管
上清液
-
10
10
-
不同濃度的vc溶液
-
-
-
10
蒸餾水
10
-
-
-
試劑四工作液
20
20
-
20
abts工作液
170
170
-
170
試劑一
-
-
190
-
充分混勻，室溫避光靜置6min。測(cè)定405nm處的吸光度。分別記為a空白、a測(cè)定、a對(duì)照、a陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測(cè)1-2次。
三、abts自由基清除率的計(jì)算
1.陽(yáng)性對(duì)照的自由基清除率計(jì)算公式：
abts自由基清除率dvc% =[(a空白-a陽(yáng)性對(duì)照)÷a空白]×100%。
2.樣本的自由基清除率計(jì)算公式：
abts自由基清除率d% =[a空白-(a測(cè)定-a對(duì)照)]÷a空白×100%。
注意事項(xiàng)：
1.不同樣本清除abts自由基的能力可能相差很大，如果要比較不同樣本的abts自由基清除能力，建議對(duì)于同一批樣本加入等量的樣本，紅酒、組織勻漿、果汁等液體樣本加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。在比較時(shí)，將樣本根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，比較同樣濃度（相同稀釋倍數(shù)）的清除率大小。
2.樣本建議當(dāng)天提取當(dāng)天檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1.取0.05g辣椒加入1ml提取液進(jìn)行勻漿研磨，離心取上清后按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算清除率得：
d%=[a空白-(a測(cè)定-a對(duì)照)]÷a空白×100% =[1.111-(0.365-0.061)]÷1.111×100%=72.637%。