溶菌酶是一種天然蛋白質(zhì),具有抑菌、消炎和抗病毒等功能。而蛋清中的溶菌酶含量較高,很多商品的溶菌酶都是從蛋清中提取的,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥制劑、食品防腐和生物工程等領(lǐng)域。
根據(jù)gb/t25879-2010,測定雞蛋蛋清中溶菌酶含量的方法為:分光光度法。
1.試劑配制
氯化鈉溶液:稱取氯化鈉0.9g,溶解于蒸餾水中,定容至100ml。
溶菌酶標準工作液:稱取溶菌酶標準品(優(yōu)級純,活力在20000u/mg左右),0.5000g,以氯化鈉溶液定容至1000ml,得到500μg/ml溶菌酶標準工作液,于4℃密封保存,一周內(nèi)使用。
2.繪制標準曲線
準備5個25ml容量瓶,采用opus電子瓶口分配器(20ml款)的stepper模式,設(shè)置5個分液體積分別為1、2、3、4、5ml,排氣泡后進行分液,將此5個體積的溶菌酶標準工作溶液分別加入5個容量瓶中,以氯化鈉溶液釋至刻度,混勻,用10mm石英比色皿比色,以氯化鈉溶液為參比溶液,在波長281nm處依次測定各標準工作液的吸光度,以溶菌酶標準工作液濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線,并求出標準曲線回歸方程。
3.試樣測定
雞蛋蛋清用4層紗布過濾,用miragen電動移液器移取過濾試樣1ml,用氯化鈉溶液稀釋定容至100ml,混勻,避免起泡沫。再用miragen電動移液器吸取5ml蛋清的氯化鈉溶液,1310g離心5min,取上清液,按照繪制標準曲線的操作步驟,在波長281nm處測定試樣溶液的吸光度。平行測定三次,取結(jié)果的算術(shù)平均值,由標準曲線回歸方程計算試樣溶液中溶菌酶的濃度。
實驗室移取幾微升到幾毫升的液體,一般采用移液器(手動和電動兩種)。手動移液器需要手轉(zhuǎn)旋鈕調(diào)節(jié)數(shù)值,手指按壓和回松進行排液和吸液。miragen電動移液器,數(shù)值靠設(shè)定或選定,電機控制活塞運動。而且吸液和排液可分次數(shù)且各段體積可調(diào),分液程序可儲存,可實現(xiàn)單吸多排、多吸單排等效果,具有步驟少、更穩(wěn)定、調(diào)數(shù)快、模式多等諸多優(yōu)勢。
赫施曼opus電子瓶口分配器精度可達萬級,一次裝液可完成相同或不同體積的連續(xù)分液,搭配miragen電動移液器,非常適合做標準曲線,適用各種需要分液和配制標準曲線的實驗室、生產(chǎn)線,應(yīng)用廣泛。