植物rna提取試劑盒的操作步驟
背景
植物rna提取試劑盒用于從各種植物中提取純化高品質(zhì)總rna，也適用于真菌菌絲rna的提取。獨(dú)-特的shredder分離柱，用于勻質(zhì)化和過濾高粘度的植物或真菌裂解物，同時(shí)采用硅基質(zhì)膜吸附rna進(jìn)行純化，使多聚糖等各種污染物通過洗滌被有效去除，經(jīng)洗脫的rna可直接用于各種下游實(shí)驗(yàn)。由本試劑盒提取rna分子量大于200堿基，純度高，幾乎無dna殘留。如果是對(duì)微量dna非常敏感的rna實(shí)驗(yàn)，殘留的dna可利用無rnase的dnase在柱上進(jìn)行消化去除。提取的rna可用于northern blot、dot blot、rt-pcr和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。
植物rna提取試劑盒
操作步驟：
1、50-100 mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl buffer rl(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇)或buffer rlc。渦旋振蕩使其充分裂解。
2、將步驟1所得全部液體轉(zhuǎn)移至已裝入收集管的過濾柱中，12000rpm(~～13400×g)離心2分鐘，將收集管中的上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管(自備)中。
3、在步驟2所得干凈的裂解液中加入0.5倍體積的無水乙醇，迅速混勻。
注意：加入乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，但不影響后續(xù)試驗(yàn)。
4、將上步得到的溶液轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請(qǐng)分兩次轉(zhuǎn)入;12000rpm離心15秒，棄掉廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl buffer rw1，12000rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6、配制dnase i混合液：取52μl rnase-free water，向其中加入8μl 10×reaction buffer和20μl dnase i(1 u/μl)，混勻，配制成終體積為80μl的反應(yīng)液。
7、向吸附柱中直接加入80μl dnase i混合液，20-30℃孵育15分鐘。
8、向吸附柱中加入350μl buffer rw1,12000rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl buffer rw2(使用前檢查是否加入無水乙醇),12000rpm離心15秒,棄廢液。
10、重復(fù)步驟9。
11、將吸附柱放回收集管中，12000rpm離心1分鐘，將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以*晾干吸附柱中的無水乙醇。
12、將吸附柱裝入新的離心管中，向吸附膜的中間加入30-50μl rnase-free water，室溫放置1分鐘，12000rpm離心1分鐘，得到的rna溶液保存在-70℃，防止降解。