cesi 8000 -thermo q-exactive系統(tǒng)對(duì)生物制品第三水平的快速表征
在生物制藥行業(yè)，由于單克隆抗體藥物（mabs）的雜質(zhì)和異質(zhì)性可以影響安全性或療效，對(duì)其進(jìn)行全面和可重復(fù)性的表征至關(guān)重要。單克隆抗體是一類高分子量的糖蛋白（約150 kda），同時(shí)包含一些其他的翻譯后修飾（ptms）。單克隆抗體肽譜（第三水平表征）可以提供關(guān)于純度和異質(zhì)性的定性和定量的信息。毛細(xì)管電泳結(jié)合質(zhì)譜具有優(yōu)越的分離效率和對(duì)于單克隆抗體肽段和糖肽的表征能力。運(yùn)用電噴霧（esi）作為電離源，將ce和esi整合在一個(gè)動(dòng)態(tài)的過中（cesi技術(shù)），可對(duì)多肽和單抗進(jìn)行高效的分析。
本文中，我們將展示使用cesi 8000（ab sciex separation）結(jié)合q-exactive質(zhì)譜（thermo）系統(tǒng)的對(duì)*的第三水平的表征數(shù)據(jù)。該分析是將ce與esi整合在一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程中，與高分辨質(zhì)譜結(jié)合使用，結(jié)果顯示該聯(lián)用有如下優(yōu)勢(shì)。不同大小的肽段（3-65氨基酸）都可以被定性、分離和定量。特別是，我們可以對(duì)僅僅100 fmol（15 ng）的樣品進(jìn)行降解熱點(diǎn)的定性定量分析，如天冬酰胺脫酰胺化、蛋氨酸氧化、*環(huán)化和c末端賴氨酸的異質(zhì)性。通過對(duì)糖肽的分離、定性和定量可以全面表征asn300的糖基化熱點(diǎn)。總體來說，這些結(jié)果表明使用cesi技術(shù)結(jié)合高分辨率的質(zhì)譜可以僅需很少的進(jìn)樣量并只使用單一蛋白酶——*，通過對(duì)肽段及糖肽譜圖分析，就具有對(duì)單抗快速全面表征的能力。
cesi技術(shù)對(duì)于質(zhì)譜分析的優(yōu)勢(shì)
• 低流速，cesi技術(shù)使用的流速大約在20 nl/min，能大化離子化效率，且大大降低離子抑制效應(yīng)，從而保證修飾肽段和糖肽更好的離子化。cesi技術(shù)使用的是一根開管的毛細(xì)管，因而無需其它的毛細(xì)管和泵連接流控裝置。
• 高效的分離，毛細(xì)管電泳的固有高分離效率以及尖銳的峰型可保證高靈敏度和可重復(fù)性的定性定量分析。
• 低樣品用量，cesi技術(shù)需要極少的進(jìn)樣體積（<250 nl）和樣品量（<25 ng）。
• 樣品殘留，使用開管模式且沒有任何固體填充，所有樣品（包括親水性和疏水性）都會(huì)從毛細(xì)管中流出，可以覆蓋到單抗的全部序列并且沒有任何樣品損失和樣品殘留。
• 全面，cesi技術(shù)在單次運(yùn)行中使用單一的蛋白酶——*，可實(shí)現(xiàn)100%蛋白序列覆蓋率并可同時(shí)完成單抗純度、穩(wěn)定性和糖基異質(zhì)性的定性定量分析。
• 重現(xiàn)性，在三針重復(fù)進(jìn)樣，每針45分鐘的分離中，遷移時(shí)間相差小于30秒（<1.5% rsd），修飾和未修飾的肽段相對(duì)含量測(cè)定變化小于2%。
• 正交，cesi技術(shù)使用和lc-ms方法正交的分離機(jī)制分離、鑒定、定量和驗(yàn)證序列變異以及得到翻譯后修飾信息。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)樣品制備：從10 mg/ml 樣品溶液中取出100 μg 樣品，用rapigest稀釋變性，使用dtt還原和iam烷基化，樣品在37 ℃經(jīng)過*酶解過夜，干燥，用前導(dǎo)電解質(zhì)溶液（200 mm醋酸銨，ph=4）稀釋三倍，得到終濃度為300 ng/μl的抗體酶解產(chǎn)物。
cesi-ms/ms：ab sciex 的cesi 8000連接 thermo的q-exactive質(zhì)譜儀。
向熔融石英毛細(xì)管中進(jìn)樣50 nl溶于約100 mm前導(dǎo)電解質(zhì)中的樣品（相當(dāng)于100 fmol或15 ng的單抗酶解產(chǎn)物），并在瞬時(shí)等速電泳下進(jìn)行分離前的濃縮。以10%的醋酸作為背景電解質(zhì)，進(jìn)口端緩沖瓶和cesi噴口間的分離電壓為20 kv。樣品重復(fù)進(jìn)樣三次進(jìn)行分析。
質(zhì)譜的數(shù)據(jù)采集采用的是數(shù)據(jù)相關(guān)采集（dda）方式，一級(jí)質(zhì)譜的分辨率為70k，二級(jí)質(zhì)譜的分辨率為17.5k。dda的參數(shù)如下：
一級(jí)質(zhì)譜大采集時(shí)間為120 msec，掃描范圍為150-1800 m/z，二級(jí)質(zhì)譜掃描強(qiáng)度大于3.3×104的前10種離子，大采集時(shí)間為60 msec。hcd裂解使用27%的碰撞能量。質(zhì)譜掃描周期小于/等于1秒。為匹配cesi的尖峰（約30s寬），動(dòng)態(tài)排除時(shí)間設(shè)為15秒。
數(shù)據(jù)分析：數(shù)據(jù)分析運(yùn)用ab sciex proteinpilot™（肽段和修飾后肽段鑒定），proteinmetrics byonic（糖肽鑒定）和thermo xcalibur（肽段定量）。通過proteowizard ms將thermo的.raw文件轉(zhuǎn)換成.mgf文件。使用*、常見雜質(zhì)、以及蛋白的逆序數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。手動(dòng)提取糖肽并通過ms/ms圖譜進(jìn)行糖類離子的確認(rèn)。
cesi技術(shù)過程
使用瞬時(shí)等速電泳-毛細(xì)管區(qū)帶電泳來分離蛋白藥物的酶解產(chǎn)物。在區(qū)帶電泳中，肽段根據(jù)它們的電荷/阻力系數(shù)，（即電荷/質(zhì)量比）進(jìn)行分離。因此根據(jù)肽段與其ptm產(chǎn)物的電荷或質(zhì)量不同而得以分離。在毛細(xì)管區(qū)帶電泳中，向毛細(xì)管入口端通過壓力進(jìn)樣約10%毛細(xì)管體積的樣品，使樣品在瞬時(shí)等速電泳（t-itp）過程中根據(jù)在電場(chǎng)中的遷移率和梯度區(qū)域進(jìn)行聚集。由于進(jìn)樣量提高了10倍，使用t-itp可將常規(guī)cze方法的靈敏度提高十倍，而并不會(huì)損失cze的高分離效率。
電滲流是在電場(chǎng)中由毛細(xì)管內(nèi)壁產(chǎn)生的電荷引起的。即使在ph為4的10%醋酸緩沖液中，也能使毛細(xì)管內(nèi)壁的硅羥基保持大量負(fù)電荷，用以驅(qū)動(dòng)電滲流到毛細(xì)管出口。與壓力驅(qū)動(dòng)產(chǎn)生的拋物線流型不同，電滲流產(chǎn)生的是塞面流型，可以減少樣品帶變寬而獲得尖銳的峰型。電滲流以20 nl/min的速度驅(qū)動(dòng)所有被分離的肽段到達(dá)電離源，之后被電離。在這個(gè)速度下，納噴源的優(yōu)勢(shì)得以充分體現(xiàn)。
電噴霧離子化的電壓施加在cesi的噴口，以10%的醋酸作為電導(dǎo)液。去除毛細(xì)管噴口的聚酰亞胺涂層并且通過化學(xué)腐蝕使小離子可以通過毛細(xì)管壁，形成毛細(xì)管電泳的電流回路。esi源的作用是使肽段從液態(tài)形式轉(zhuǎn)化成氣態(tài)形式。只有cesi中的流出物進(jìn)入esi源，而無任何鞘液的稀釋，保證了超低流速nl/min帶來超高的靈敏度。
cesi-ms技術(shù)肽段的分析
*酶解肽段具有較大的質(zhì)量范圍和電離狀態(tài)，適合用ce進(jìn)行分離。使用cesi技術(shù)，*酶解的肽段在25-38分鐘內(nèi)得以分離（如圖1）。在42分鐘后，還可以鑒定出基峰的電泳圖(bpe)中沒有看到肽段，如糖肽。后續(xù)將進(jìn)行詳細(xì)講解。三針的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，譜圖的定性比較（圖1a）和遷移時(shí)間（表1）均獲得很好的重現(xiàn)性。通常情況下，肽段在質(zhì)譜中的m/z和ce中的電荷/質(zhì)量比會(huì)存在一定的相關(guān)性（圖2b）。然而在整個(gè)遷移窗口范圍內(nèi)對(duì)不同質(zhì)/荷比的肽段的分離有助于對(duì)其進(jìn)行全面的定性和定量。圖1c中一些代表性肽段的分離峰表明了過大和過小的肽段可同時(shí)被分離。此外，從這些提取的肽段中可以發(fā)現(xiàn)ce分離得到的峰型十分尖銳（15-50秒寬），有利于肽段的定性和定量。
圖1. cesi技術(shù)對(duì)肽段分離。（a）**酶解產(chǎn)物的三次cesi-ms技術(shù)（thermo qe）分析電泳圖。（b）肽圖。（c）單次cesi- ms技術(shù)運(yùn)行中具有代表性的大小肽段的提取離子電泳圖。
100%的序列覆蓋度
在自下而上（bottom-up）的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，有許多因素可以有助于實(shí)現(xiàn)100%的蛋白序列覆蓋。除了已經(jīng)闡述過的肽段可以被cesi-ms技術(shù)更有效地分離及離子化，蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索也是一個(gè)很重要的步驟。proteinpilot™的paragon計(jì)算方法可以快速、方便地對(duì)蛋白及超過300種ptms進(jìn)行定性，使其成為蛋白酶解產(chǎn)物全面表征的重要工具。如圖2顯示了在三次重復(fù)運(yùn)行中，數(shù)據(jù)庫(kù)搜索結(jié)果均獲得了重鏈和輕鏈的100%序列覆蓋度。*酶解產(chǎn)物的混合物中很小或很大、親水或疏水的肽段都可以得以分離，使輕鏈和重鏈實(shí)現(xiàn)100%序列覆蓋度。
圖2. 經(jīng)cesi 8000 – q-exactive ms系統(tǒng)分離檢測(cè)，protein pilot™數(shù)據(jù)庫(kù)搜索而獲得的*重鏈和輕鏈的100%的序列覆蓋率。
上圖顯示了100%的覆蓋率的重鏈和輕鏈。中圖顯示重鏈和輕鏈這兩組蛋白中用于蛋白指認(rèn)的代表性肽段。下圖顯示了鑒定的序列覆蓋率，編碼顏色反映了鑒定自信度。在輕鏈中，幾乎100%的肽段序列覆蓋自信度超過95%（綠色）。兩個(gè)低自信度的短肽段（黃色）使用手動(dòng)檢索進(jìn)一步確認(rèn)。三次重復(fù)性cesi-ms技術(shù)分析均達(dá)到了100%序列的覆蓋度。
肽譜第三水平的表征
cesi-ms技術(shù)得到的肽譜與lc-ms相似，通過串聯(lián)質(zhì)譜（ms/ms）和提取肽段電泳峰識(shí)別肽段序列。提取的離子電泳（xies）可用于不同的生物藥的序列和ptm豐度的比較，如不同的單抗批次或是原研藥、生物類似藥和生物優(yōu)勝藥的比較。
表1. *降解/翻譯后修飾熱點(diǎn)的鑒定和相對(duì)定量。
圖3. *中降解熱點(diǎn)的肽譜。ms/ms 鑒定修飾前后的肽段（a）n-端*環(huán)化（焦*），（b）蛋氨酸氧化（metox），（c）c-端賴氨酸的異質(zhì)性，（d）天冬酰胺脫酰胺化，（e）*氧化，（f）賴氨酸糖基化。提取離子電泳圖的坐標(biāo)軸按低豐度肽段的峰高調(diào)整。氨基酸位點(diǎn)和ptm種類信息已標(biāo)注在相應(yīng)的圖中。
圖1a和1c中基峰圖和提取離子圖顯示出ce*的尖銳的峰型可用于肽譜的比較。cesi技術(shù)超高的分離能力結(jié)合ms在質(zhì)量維度上的高分辨率可很容易的比較兩個(gè)或以上的樣品的提取離子峰圖。對(duì)*中肽段降解熱點(diǎn)成功的定性和定量表征（圖3和表1），可充分地說明cesi-ms技術(shù)對(duì)于肽譜分析的能力。常見的降解ptms有n-端*環(huán)化，蛋氨酸氧化，c-端賴氨酸異質(zhì)性，天冬酰胺脫酰胺化，*脫氧化和賴氨酸糖基化。除此之外，還有一些proteinpilot™可鑒定出、但在這里沒有列出的其它一些豐度略小的ptms降解位點(diǎn)。
通過高度匹配的高分辨ms/ms碎片譜圖(圖3)和微小的母離子質(zhì)量誤差（表1）可對(duì)這些降解ptms進(jìn)行明確的鑒定。對(duì)于質(zhì)量偏移較大的修飾（如氧化，+16 da；脫水，-18 da； 糖基化，+162 da；和c端賴氨酸缺失，-128 da），匹配的質(zhì)譜圖可以提供明確的依據(jù)。對(duì)于質(zhì)量變化較小的肽段，如天冬酰胺脫酰胺化，僅僅只有一個(gè)道爾頓的質(zhì)量區(qū)別，cesi技術(shù)可提供進(jìn)一步的鑒定信息。對(duì)于測(cè)量相差一個(gè)道爾頓的兩個(gè)峰，大的挑戰(zhàn)在于即使使用高分辨的ms，未修飾和脫酰胺肽段的同位素分布還是會(huì)互相重疊。此外，反相色譜往往不能分離沒有疏水性變化的物質(zhì)，如天冬酰胺（asn）轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼幔╝sp）。然而，asn（中性）和asp（酸性）之間一個(gè)電荷的差異能很好地被ce分離。因此，這兩個(gè)肽段可通過ce在空間上得到分離（圖3d），從而證明它們ms上較小的質(zhì)量差異是來自兩個(gè)不同的肽段，而不是同一個(gè)未修飾肽段中的同位素峰（13c）。此外，中性的天冬酰胺和帶負(fù)電的天冬氨酸會(huì)有不同的向陽極遷移時(shí)間改變（大約30秒）。也就是說，陽極對(duì)于帶負(fù)電荷較多的肽段有更強(qiáng)的吸引力。
對(duì)其它在ms中有更明顯質(zhì)量數(shù)變化的ptms，毛細(xì)管電泳也可體現(xiàn)出分離的優(yōu)勢(shì)。例如，兩性的n-端*（在cesi-ms技術(shù)的酸性條件下帶正電荷）轉(zhuǎn)變?yōu)橹行缘慕?，電荷的差異導(dǎo)致降解ptm后遷移時(shí)間有明顯的改變（圖3a）。另外，*相對(duì)于焦*向陽極遷移的改變，也和脫酰胺化相同。同樣，重鏈上c- 端賴氨酸的異質(zhì)性源于帶正電荷的賴氨酸丟失，也有一個(gè)很大向陽極的遷移時(shí)間改變（圖3c）。更重要的是，所有修飾的肽段都具有很高的遷移時(shí)間重現(xiàn)性，其標(biāo)準(zhǔn)偏差小于30秒。因此，這些遷移時(shí)間的變化適用于肽圖的定性分析。當(dāng)然，這樣的分離能力也適用于ptm的相對(duì)定量。同樣，cesi技術(shù)分離不僅可對(duì)脫酰胺化修飾進(jìn)行高自信度的鑒定，還提高了對(duì)脫酰胺化肽段定量的能力。肽段的定量是基于提取離子峰在時(shí)間軸上的量來實(shí)現(xiàn)的。由于未修飾和脫酰胺的肽段在cesi技術(shù)過程中可空間分離，其同位素分布不會(huì)重疊，因而它們的提取離子峰在時(shí)間軸上也不會(huì)重疊。
在圖3d中我們可以觀察到分別代表未修飾和脫酰胺的肽段的兩個(gè)提取離子峰可*被分離。然而，對(duì)于即使ce也不能分離的肽段，毛細(xì)管電泳也可以有超越lc技術(shù)的相對(duì)定量?jī)?yōu)勢(shì)，因?yàn)閏esi技術(shù)的低流速可消除離子抑制作用。因此，無法分離的修飾后和未修飾的肽段峰可以更好地代表其真實(shí)的相對(duì)含量。在*降解ptms的表征中，這個(gè)優(yōu)勢(shì)可以應(yīng)用于蛋氨酸氧化、*氧化和賴氨酸糖基化的相對(duì)定量。
表1展示的是降解ptms的相對(duì)含量。值得注意的是，在三針cesi-ms技術(shù)的運(yùn)行中，相對(duì)豐度變化一般小于0.2%。然而，對(duì)于那些在樣品制備中也可能發(fā)生的修飾（如蛋氨酸氧化和天冬酰胺脫酰胺化），它們?nèi)樦貜?fù)的相對(duì)豐度變化小于3%。對(duì)這些降解ptms的相對(duì)定量很直接、簡(jiǎn)單，將修飾肽段的峰面積除以它和未修飾肽段峰面積之和即可。賴氨酸糖基化的相對(duì)定量要復(fù)雜一些。*不能切割糖基化的賴氨酸，但是可以切割非糖基化的賴氨酸。因此，需要用到不同的肽段序列對(duì)它們進(jìn)行相對(duì)定量。選擇糖基化賴氨酸肽段中豐度的片段用于相對(duì)含量的計(jì)算。然而，用肽圖來進(jìn)行賴氨酸糖基化的表征會(huì)更加直觀，因?yàn)椴挥每紤]*裂解的差異。
糖肽圖譜第三水平的表征
治療性單抗的糖型通常是在和第二水平通過ms檢測(cè)完整和還原蛋白的分子質(zhì)量、以及在第四水平通過對(duì)裂解寡糖的lc或ce分離進(jìn)行表征的。n-糖基化通常連接在igg1的fc區(qū)保守序列的天冬酰胺殘基上，然而也有可能連接在可變區(qū)域、非保守區(qū)域、甚至*位點(diǎn)。因此，特異性的糖基位點(diǎn)定位成為mab表征的重要步驟。然而，、二、四水平的表征還無法很好的確認(rèn)n-糖基化的位點(diǎn)。即使是在第三水平使用lc-ms鑒定，由于rplc無法對(duì)糖肽進(jìn)行分離，也可能對(duì)糖基結(jié)構(gòu)產(chǎn)生誤判以及對(duì)相對(duì)豐度的測(cè)定存在偏差。而cesi-ms技術(shù)則可通過對(duì)糖肽的高效分離和電噴霧離子化在第三水平表征中得到全面的糖型分析結(jié)果。
圖4a和b顯示的是糖肽分離的實(shí)驗(yàn)，表2是它們的平均遷移時(shí)間。糖肽的遷移時(shí)間具有很好的重現(xiàn)性，并且在三針重復(fù)運(yùn)行中，其遷移時(shí)間相差大概在30秒左右。正如前面提到的，毛細(xì)管電泳的分離是基于肽段的電荷/阻力比。糖基中的每一個(gè)糖單元都可為相應(yīng)的糖基在cesi技術(shù)分離中增加相應(yīng)的阻力，這就是cesi-ms技術(shù)可將糖肽分離和表征的關(guān)鍵。含有高甘露糖的糖肽：m5（也稱為man5）、非巖藻糖基化的雙天線復(fù)合物：a2、a2g1和a2g2（也稱為g0、g1和g2）、巖藻糖基化的雙天線復(fù)合物：fa2，fa2g1和fa2g2（也被稱為g0f、g1f和g2f）和一些不帶電荷的糖基都可通過這個(gè)機(jī)制進(jìn)行分離。對(duì)于巖藻糖基化（圖4a）和非巖藻糖基化（圖4b）系列的糖型，從電泳峰可以看到基線分離。此外，盡管不太明顯但從圖4可以看出，相同糖基結(jié)構(gòu)的非巖藻糖基化和巖藻糖基化的糖型也有不同的遷移時(shí)間。例如，a2和fa2（也可稱為g0和g0f）的平均遷移時(shí)間不同，分別為35.00和34.72分鐘（表2）。又如，a1，fa1和fa2糖型（也可稱為g0-glcnac，g0f-glcnac和g0f）與5-n-乙酰神經(jīng)氨糖酸（neu5ac），由于糖肽的電荷發(fā)生變化導(dǎo)致了遷移時(shí)間的較大改變。這個(gè)機(jī)制與降解ptms遷移時(shí)間改變的機(jī)制相似，修飾后的糖肽比未修飾的糖肽更偏酸性（圖3a、c和d）。
與其它修飾后的肽段一樣，糖肽的提取離子電泳圖依賴通過對(duì)母離子及其碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)的測(cè)量對(duì)它們進(jìn)行定性。糖肽鑒定同樣也具有非常高的質(zhì)量精度（表2），均低于±5 ppm誤差。我們以相對(duì)豐度低的a2g2s1和的fa2g1的圖譜來說明ms/ms用于糖肽定性的性能（圖4b）。與大多數(shù)已鑒定的糖肽質(zhì)譜圖一樣，其中有一些和肽段序列吻合的b-和y-型離子，然而譜圖匹配主要來源于糖的特征峰：完整糖肽的分子量的測(cè)定，糖肽上糖單位的多級(jí)丟失，以及多級(jí)碎片離子。即使豐度低的糖肽都有高響應(yīng)高質(zhì)量匹配度的圖譜，說明對(duì)其他更高豐度的糖肽具有更高的鑒定能力。表2是*鑒定出的糖型相對(duì)定量值。注意的是，鑒定出a2g2s1糖型的相對(duì)豐度僅為0.06%。從相對(duì)豐度的fa2g1（54.49%）到a2g2s1（0.06%），其定量范圍跨越3個(gè)數(shù)量級(jí)。在這1000倍的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)，鑒定并定量出20種糖型的糖肽。而且大部分糖肽的相對(duì)豐度數(shù)值具有較好的重現(xiàn)性，其變異系數(shù)均小于10%。因此，cesi技術(shù)和ms技術(shù)聯(lián)用可高效分離并高靈敏度的鑒定糖肽，從而對(duì)mab的糖基化進(jìn)行可靠的鑒定和定量。
圖4. 經(jīng)cesi-ms鑒定的糖肽的提取離子電泳圖。經(jīng)ms/ms鑒定，提取的離子峰用于相對(duì)定量。（a）巖藻糖基化糖型和（b）非巖藻糖基化糖型。圖中以豐度低的糖型a2g2s1為代表，展示了其糖肽的ms/ms圖。圖中綠色標(biāo)注的是糖基碎片離子。詳細(xì)的糖肽表征結(jié)果見表2。
表2. *重鏈n300位點(diǎn)上糖基化的鑒定和相對(duì)定量。
結(jié)論本文展示了利用cesi-ms技術(shù)平臺(tái)，即穩(wěn)定高效的分離和納噴霧離子化技術(shù)cesi技術(shù)，與高準(zhǔn)確度、高分辨率的質(zhì)譜技術(shù)的在線結(jié)合，對(duì)治療性單抗藥物進(jìn)行定性和定量分析。在cesi技術(shù)的設(shè)計(jì)中，毛細(xì)管出口端本身也是電噴霧的噴針，使得肽段被分離后直接經(jīng)電噴霧離子化進(jìn)入質(zhì)譜。cesi技術(shù)的納噴源中產(chǎn)生的液滴非常小，因此可獲得的離子化效率。20 nl/min的超低流速，極大的降低了離子抑制效應(yīng)，為相同樣品中的低豐度糖肽提供了高靈敏度的分析的可行性。對(duì)豐度低至0.06%的糖肽的相對(duì)定量展示了方法的高靈敏度。對(duì)豐度跨越三個(gè)數(shù)量級(jí)的20個(gè)糖肽的糖型鑒定和定量展示了方法寬泛的動(dòng)態(tài)范圍。此外，cesi-ms技術(shù)還可實(shí)現(xiàn)對(duì)單抗藥物中相對(duì)豐度低至0.3%的降解ptm熱點(diǎn)，如蛋氨酸氧化、天冬酰胺脫酰胺化、n-端*環(huán)化成焦*、重鏈c-端賴氨酸的異質(zhì)性、*氧化和賴氨酸糖基化的分析。對(duì)*的上述分析結(jié)果，充分的展示了cesi-ms技術(shù)是生物制品表征中一項(xiàng)具有眾多優(yōu)勢(shì)的技術(shù)。它將成為對(duì)于一級(jí)序列和糖譜的快速、全面、高重現(xiàn)性分析的重要手段。
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