抗亞碲酸鹽大腸桿菌:型pcr進(jìn)口試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. dna模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在pcr反應(yīng)中，新合成的dna是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板dna復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是dna也可以是rna，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×pcr buffer
4．2mm dntpmix：含datp、dctp、dgtp、dttp各2mm
5．taq酶操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×pcr buffer 5μl
dntp mixl 4μl
引物1（10pm） 2μl
引物2（10pm） 2μl
taq酶（2u/μl） 1μl
dna模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddh2o至 50 μl
視pcr儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置pcr儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，pcr產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．pcr的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μllufang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。