蛋白酶-切除蛋白標簽的有力工具隨著蛋白質(zhì)組學技術的迅猛發(fā)展，重組蛋白的使用在近年來大大增加，為了提高重組蛋白的產(chǎn)量或賦予重組蛋白新的特性（這些特性可以用來對重組蛋白進行純化或檢測），可以在克隆過程中添加額外的標簽到目標蛋白的n端或者c端，標簽可根據(jù)功能分為兩類，純化標簽和可溶性標簽，純化標簽可用于親和層析，快速純化蛋白；可溶性標簽用于促進蛋白質(zhì)的正確折疊，增加可溶性。
常見的標簽有6*his、gst、mbp、strep(ⅱ)、flag、sumo和組合式雙標簽或多標簽。gst、mbp、sumo等蛋白標簽由于分子量較大，通常需要去除，以消除其對目標蛋白的結(jié)構(gòu)與功能的影響；多肽標簽（如strep(ⅱ)、flag）分子量較小，免疫原性較低，基本不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，通?？梢圆挥萌コ糜诮Y(jié)構(gòu)生物學或其他較高級研究的蛋白通常也要將小分子量多肽標簽去除，以達到最佳效果。實際操作中化學切割方法較為少用，因為不僅裂解位點的特異性低，還可能對目的蛋白產(chǎn)生不必要的修飾。目前常用的是反應條件溫和且具有高度的位點特異性的酶解法。
表1.常用的蛋白酶及對應切割位點
蛋白酶
表達宿主
切割位點
酶的作用
腸激酶
大腸桿菌
asp-asp-asp-asp-lys
去除位于蛋白n-末端的融合蛋白，以除去不需要的標簽
tevprotease
大腸桿菌
glu-asn-leu-tyr-phe-gln↓-gly
融合蛋白標簽切除
3c protease
大腸桿菌
leu-glu-val-leu-phe-gln↓gly-pro
特異切割含有3c酶切位點的融合蛋白
sumoprotease
大腸桿菌
識別完整的含有100個氨基酸的sumo標簽蛋白
高效地把sumo從融合蛋白上切割下來
牛凝血酶
牛的血漿純化制得
leu-val-pro-arg-↓-gly-ser和gly-arg-↓-gly
融合蛋白標簽切除
克隆過程中構(gòu)建相應的氨基酸識別序列，即可保證后續(xù)可通過合適的蛋白酶對融合蛋白標簽進行切除。
小翌已為大家準備好了性價比的幾款蛋白酶，下面帶大家一一了解下：
01重組腸激酶重組腸激酶（rek）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性，切割位點asp-asp-asp-asp-lys，可去除位于蛋白n-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽，是n末端融合通常選擇的蛋白酶,在其他殘基的不規(guī)則切割發(fā)生水平較低。
翌圣的重組腸激酶（rek）采用大腸桿菌重組表達，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料，純度高、活性高、特異性強、適用范圍廣，在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標簽，由于具有酶切活性，酶切反應使用量少，不影響下游蛋白應用，可不考慮去除。后續(xù)如需去除可用陰離子交換樹脂（如deae-6ff）對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下：平衡緩沖液：25 mm tris-hcl ph 8.0，洗脫緩沖液：25 mm tris-hcl ph 8.0，含100 mm nacl
02牛凝血酶凝血酶是由大小分別為31 kd和6 kd的兩條肽鏈通過二硫鍵組成的一種絲氨酸蛋白水解酶，可從動物血漿中利用已激活凝血酶原水解制得；凝血酶切割序列專一，水解效率高，在分子生物學、生物化學或生物工程制藥研究中常作為工具酶用于重組融合蛋白（包含凝血酶識別位點）的特異性斷裂。
翌圣的牛凝血酶是從牛的血漿純化制得，具有純度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、滅活病毒、生產(chǎn)穩(wěn)定性好等特點。該酶最適切割位點：a-b-pro-arg-↓-x-y（其中，a和b為疏水氨基酸，x和y為非酸性氨基酸），常見的識別序列為：1.leu-val-pro-arg-↓-gly-ser。2.gly-arg-↓-gly。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用苯甲脒或肝素瓊脂糖親和純化去除。
03rtev protease翌圣的重組型tev蛋白酶（rtev）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然tev酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。rtev是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性，嚴格識別七氨基酸序列exxyxq↓(g/s)，切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應用的七氨基酸序列為：glu-asn-leu-tyr-phe-gln↓-gly。rtev在ph 7.0，30℃時可達到最佳活性，但在ph 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內(nèi)皆有活性（見表2），使得反應條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動。另外rtev切割后也能利用其n端的6×his標簽，通過ni-nta樹脂去除，以達到純化目的蛋白的目的。
表2. 不同溫度下rtev酶切活性
043c protease3c蛋白酶是切割小rna病毒科非結(jié)構(gòu)蛋白的關鍵酶，在病毒復制過程中發(fā)揮著重要作用。鼻病毒屬于小rna病毒科，其中的人鼻病毒3c蛋白酶基因編碼區(qū)全長552bp，編碼的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量約為22000 da。人鼻病毒3c蛋白酶具有高度的酶切特異性，能特異切割位于gln-gly之間的肽鍵，識別位點為leu-glu-val-leu-phe-gln↓gly-pro。
翌圣將人鼻病毒3c蛋白酶的編碼區(qū)基因，在大腸桿菌中進行重組表達，純化后獲得了高純度的重組3c蛋白酶，該蛋白酶能特異切割含有3c酶切位點的融合蛋白，具有良好的生物學活性。同時，翌圣生產(chǎn)的3c蛋白酶帶有gst和mat標簽蛋白，有利于后期將其從酶切體系中去除。
05sumo proteasesumo蛋白酶識別完整的含有100個氨基酸的sumo（small ubiquitin-like modifier）標簽蛋白，并能高效地把sumo從融合蛋白上切割下來。與ek和tev等蛋白酶的識別位點相比，由于其識別序列長，所以sumo蛋白酶酶切反應有很高的特異性，且在較寬范圍的反應環(huán)境體系中保持較高的活力，例如溫度（4-30℃）、ph（5.5-9.5）等。sumo蛋白酶還具有多聚his標簽，便于使用親和層析的方法去除sumo蛋白酶，純化目的蛋白。
產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱
貨號
規(guī)格
目錄價/元
enterokinase,recombinant,expressedine.coli大腸桿菌表達重組腸激酶(不帶標簽)bovinethrombin,highspecificactivity,>2000iu/mg牛凝血酶(高活力,>2000iu/mg)
20401es60/70/76
100u/200 u
/500 u
425/645/1245
bovinethrombin,highspecificactivity,>2000iu/mg牛凝血酶(高活力,>2000iu/mg)
20402es03/05
1ku/2ku
536/956
rtevprotease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶
20403es80/92
1ku/
10×1000u
215/1595
3cprotease
20409es60/76/80
100 u/500 u
/500u×2
372/923/1473
sumoprotease
20410es60/70/80
100 u/500 u
/1000u
223/873/1473
deaeagarose6ff
20540es25/60
25 ml/100 ml
300/788
heparinagarose6ff(肝素親和純化介質(zhì))
20493es08/25
5 ml/25 ml
600/2500
hissepni-ntaagaroseresinhis標簽蛋白瓊脂糖純化樹脂
20502es10/50
10 ml/50 ml
678/2848
gstsepglutathioneagaroseresin谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(用于gst標簽蛋白純化)
20507es10/50/60
10 ml/50 ml
/100 ml
928/3848/6898
相關產(chǎn)品訂購產(chǎn)品名稱
貨號
規(guī)格
目錄價/元
humanα-thrombin(factoriia)人α-凝血酶(凍干粉)
20408es80
1000 u
2898
prescissionprotease(psp)重組prescission蛋白酶
20425es60/76
200 u/500 u
1126/2136
ides protease（免疫球蛋白 g 降解酶）
20412es84/90
2000 u/
5000 u
2233/4953
pngasef(n-糖酰胺酶f或肽n-糖苷酶f）
20407es01/02
15000u/
75000 u
1125/4525
pngase f, recombinant, expressed in yeast
酵母重組表達n-糖苷酶 f
20415es01/02
15000 u/
75000 u
1225/4925
endoh糖苷內(nèi)切酶h
20414es92/97
10000 u/
50000 u
585/2195
endo s糖苷內(nèi)切酶s
20413es80/90
1000 u/
5×1000 u
325/1365
recombinanttrypsin（ms-safe）重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級）
20416es60
100 µg
595