生產菌種的衰退與復壯
菌種是從事微生物學以及生命科學研究的基本資料，特別是利用微生物進行有關生產，如抗生素、氨基酸、釀造等工業(yè)，更離不開菌種。因此，菌種保藏是項重要的工業(yè)微生物學基礎工作，優(yōu)良的菌種來之不易，所以在科研和生產中應設法減少菌種的衰退和死亡。其任務先是使菌種不死亡，同時還要盡可能保證菌種經過較長時間后仍然保持著生活能力，不被其他雜菌污染，形態(tài)特征和生理性狀應盡可能不發(fā)生變異，以便今后長期使用。
因自發(fā)突變而使某物種原有的系列生物學性狀發(fā)生量變和質變的現(xiàn)象稱為菌種衰退。衰退可以是生理上的，如產孢子能力、發(fā)酵主產物比例下降等，也可以是形態(tài)上的，如原有典型性狀的消失。就產量性狀而言，菌種的負突變就是衰退。具體體現(xiàn)有：①原有形態(tài)性狀變得不典型了，如芽孢和伴孢晶體變小甚至喪失等；②生長速率變慢，產生的孢子變少；③代謝產物生產能力下降，這種情況其普遍；④
致病菌對宿主侵染力下降；⑤抗不良環(huán)境條件（抗噬菌體、抗低溫等）能力減弱等等。
菌種衰退是發(fā)生在細胞群體中個由量變到質變的逐漸演化過程。先，在細胞群體中出現(xiàn)個別發(fā)生負突變的菌株，這時如不及時發(fā)現(xiàn)并采取有效的措施，而味地移種傳代，則群體中這種負突變個體的比例逐漸增大，后占據(jù)了優(yōu)勢，整個群體發(fā)生嚴重的衰退。因此，開始時所謂“純”的菌株，實際上其中已包含著定程度的不純因素；同樣，到了后來，整個菌種雖已“衰退，但也是不純的，即其中還會有少數(shù)尚未衰退的個體存在。
定期使菌種復壯（rejuvenation）是防止菌種衰退有效的方法。菌種復壯就是在菌種發(fā)生衰退后，通過純種分離和性能測定，從衰退的群體中找出尚未衰退的個體，以達到恢復該菌種原有性狀的種措施。
狹義的復壯僅是種消的措施，指的是在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和測定典型性狀、生產性能等指標，從已衰退的群體中篩選出少數(shù)尚未衰退的個體，以達到恢復原菌株固有性狀的相應措施。而廣義的復壯應是項積的措施，是在菌種尚未衰退之前定期地進行純種分離和性能測定，使菌種的生產性能保持穩(wěn)定。廣義的復壯過程有可能利用正向的自發(fā)突變，在生產中培育出更優(yōu)良的菌株。
1.菌種衰退的防止
微生物都存在著自發(fā)突變，而突變都是在繁殖過程中發(fā)生或表現(xiàn)出來的，減少傳代次數(shù)就能減少自發(fā)突變和菌種衰退的可能性。因此，不論在實驗室還是在生產實踐上，必須嚴格控制菌種的傳代次數(shù)，以減少細胞分裂過程中所產生的自發(fā)突變幾率（10-9-10-8）。
各種生產菌株對培養(yǎng)條件的要求和敏感性不同，培養(yǎng)條件若有利于生產菌株，就可在定程度上防止衰退。例如，在赤霉素生產菌g.fujikuroi的培養(yǎng)基中，加入糖蜜、天冬酰胺、、5核苷酸或等豐富營養(yǎng)物時，有防止衰退的效果。
在育種過程中，應盡可能使用孢子或單核菌株，避免對多核細胞進行處理，可以減少分離回復現(xiàn)象。在實踐上，若用無菌棉團輕巧地對放線菌進行斜面移種，就可避免菌絲接入。另外，有些霉菌如用其分生孢子傳代易于衰退，而改用其子囊孢子接種則能避免衰退。在用于工業(yè)生產的菌種中，重要的性狀大多屬于數(shù)量性狀，而這類性狀恰是易衰退的。斜面保藏的時間較短，只能作為轉接和短期保藏的種子用，應該在采用斜面保藏的同時，采用沙土管、凍干管和液氮管等能長期保藏的手段。
2.菌種的復壯
在衰退菌種的細胞群中，般還存在著保持原有典型性狀的個體。通過純種分離法，設法把這種細胞挑選出來即可達到復壯的效果。純種分離方法可以分兩類：類是采用平板表面涂布法或平板劃線分離法可達到“菌落純”水平；另類是用較精致的方法，如用“分離小室”進行單細胞分離，用顯微操作器進行單細胞分離，或者用菌絲切割法進行單細胞分離，可達到“菌株純”的水平。
對于因長期在人工培養(yǎng)基上移種傳代而衰退的病原菌，可接種到相應的昆蟲或動植物宿主體中，通過各種特殊的活的“選擇性培養(yǎng)基”至多次選擇，就可從典型的病灶部位分離到恢復原始毒力的復壯菌株。