細胞培養(yǎng)實驗室如何構建無菌操作環(huán)境
一、細胞培養(yǎng)及其實驗室說明
組織培養(yǎng)是在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當溫度和一定營養(yǎng)條件下，使從體內(nèi)取出的組織生存、生長繁殖和傳代，并維持原有的結構和功能特性。
所謂細胞培養(yǎng)是指細胞包括單個細胞在體外條件的生長。
組織細胞培養(yǎng)技術與其他一般實驗室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。目前，超凈工作臺的廣泛使用，很大程度上方便了組織細胞培養(yǎng)工作，并使一些常規(guī)實驗室有可能用于進行細胞培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)實驗室應能進行六方面的工作：無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
二、細胞培養(yǎng)實驗室無菌操作環(huán)境的構建
1、無菌操作室
無菌操作區(qū)只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，zui能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。
理想的無菌操作室應劃為三部分：
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境，同時可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c) 無菌操作間—―于無菌操作、細胞培養(yǎng)。其大小要適當，且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑*以便清潔和消毒。
工作臺安置不應靠墻壁，臺面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示ph的觀察。
無菌操作間的空氣消毒：紫外線燈—-產(chǎn)生臭氧，并且室內(nèi)溫度及濕度均較高，不利于工作人員健康。
空氣過濾的恒溫恒濕裝置—-。
潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級別表潔凈度級別：
塵粒zui大允許數(shù)/立方米 100級 3,500 0 5 110000級
微生物zui大允許數(shù) 350,000 2,000 100 3100000級
浮游菌/立方米 3,500,000 20,000 50010300000級
沉降菌/皿 10,350,000 60,000 - 15
無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應，從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30～40min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。
2、凈化工作臺
操作簡單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。
一般細菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺主要有兩種：
a)側流式或稱垂直式
b)外流式或稱水平層流式。
凈化工作臺工作原理大致相同，通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經(jīng)空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區(qū)，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。
側流式工作臺：空氣凈化后的氣流由左或右側通過工作臺面流向對側，也有從上向下或從下向上流向對側，形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌。工作臺結構為封閉式。
外流式(水平式)工作臺：凈化后的空氣面向操作者流動，因而外方氣流不致混入操作，但進行有害物質(zhì)實驗操作則對操作者不利。