1.百螢 cell meter pe annexin v細胞凋亡檢測試劑盒概述
cell meter pe-annexin v細胞凋亡檢測試劑盒是美國aat bioquest生產(chǎn)的用于檢測細胞凋亡的試劑盒，膜聯(lián)蛋白v可以與包括pe的熒光染料結(jié)合。該染料保留了其對磷脂酰*氨酸（ps）的高親和力，因此可用作流式細胞術(shù)分析正在經(jīng)歷細胞凋亡的細胞的敏感探針。由于ps的外化發(fā)生在細胞凋亡的早期階段，pe膜聯(lián)蛋白v染色可以比基于核變化（例如dna片段化）的測定更早地鑒定細胞凋亡。 pe膜聯(lián)蛋白v染色先于膜完整性的喪失，膜完整性伴隨由凋亡或壞死過程導致的最新細胞死亡階段。因此，用pe膜聯(lián)蛋白v染色通常與碘化丙啶（pi）或7-氨基 - 放線菌素（7-aad）等活體染料結(jié)合使用，使研究者能夠鑒別早期凋亡細胞（7-aad陰性，pe膜聯(lián)蛋白v陽性）。具有完整膜的存活細胞排除7-aad，而死亡和受損細胞的膜可透過7-aad。例如，被認為存活的細胞既是pe膜聯(lián)蛋白v也是7-aad陰性的，而處于早期凋亡的細胞是pe膜聯(lián)蛋白v陽性和7-aad陰性，而處于晚期凋亡或已經(jīng)死亡的細胞都是pe膜聯(lián)蛋白v和7-aad陽性。該測定法不區(qū)分經(jīng)歷凋亡性死亡的細胞與因壞死性通路而死亡的細胞，因為在任一情況下，死亡細胞都將用pe膜聯(lián)蛋白v和7-aad染色。然而，當隨著時間測量細胞凋亡時，可以經(jīng)常從pe膜聯(lián)蛋白v和7-aad陰性（可行的，或不可測量的細胞凋亡）追蹤細胞至pe膜聯(lián)蛋白v陽性和7-aad陰性（早期凋亡，膜完整性存在），最后是pe膜聯(lián)蛋白v和7-aad陽性（末期凋亡和死亡）。細胞通過這三個階段的運動表明細胞凋亡。百螢生物是aat bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的cell meter pe-annexin v細胞凋亡檢測試劑盒。
2.百螢 cell meter pe annexin v細胞凋亡檢測試劑盒適用儀器
流式細胞儀
e x: 488nm or 561nm
e m: 575/26nm
通道: pe通道
3.百螢 cell meter pe annexin v細胞凋亡檢測試劑盒實驗方案
簡要概述
（1）用測試化合物（200μl/樣品）制備細胞
（2）添加rpe-膜聯(lián)蛋白v測定溶液
（3）在室溫下孵育20-60分鐘
（4）使用fl2通道（ex / em = 488/585 nm）用流式細胞儀分析細胞
儲備溶液配制
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°c。 避免反復凍融循環(huán)。
rpe-annexin v原液（100x）：
將含有0.2％bsa的200μlpbs加入到rpe-膜聯(lián)蛋白v（組分a）的小瓶中以制備100x rpe-膜聯(lián)蛋白v儲備溶液。 注意：將重構(gòu)的100x rpe-annexin v儲備溶液儲存在4°c。
操作步驟
a.用測試化合物處理細胞一段所需的時間（用星形孢菌素處理的jurkat細胞4-6小時）以誘導細胞凋亡。注意：膜粘附細胞的膜聯(lián)蛋白v流式細胞術(shù)分析未經(jīng)常檢測，因為在細胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，casiola-rosen等人先前報道了利用膜聯(lián)蛋白v對貼壁細胞類型進行流式細胞術(shù)的方法。
b.離心細胞，得到1-5×105個細胞/管。
c.將細胞重懸于200μl測定緩沖液（組分b）中。
d.向細胞中加入2μl100xrpe-膜聯(lián)蛋白v原液。
e.可選：為壞死細胞添加2μl100xnuclear red dcs（成分c）。
f在室溫下孵育20至60分鐘，避光。
g可選：在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加200至300μl的測定緩沖液（組分b）以增加體積。
h.使用具有fl2通道的流式細胞儀（ex / em = 488 / 585nm）監(jiān)測rpe-膜聯(lián)蛋白v的熒光強度。當將nuclear red dcs添加到細胞中時，使用fl4通道測量細胞活力。
4.百螢 cell meter pe annexin v細胞凋亡檢測試劑盒數(shù)據(jù)分析
在活的非凋亡細胞中，rpe-模聯(lián)蛋白v檢測非誘導細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所以細胞的2-6%。在凋亡細胞中，rpe-模聯(lián)蛋白v與磷脂酰*氨酸結(jié)合，磷脂酰*氨酸位于細胞膜的外葉上，因此導致染色強度增加。
圖1.使用cell meterrpe-膜聯(lián)蛋白v結(jié)合細胞凋亡檢測試劑盒檢測rpe-膜聯(lián)蛋白v對jurkat細胞中磷脂酰*氨酸的結(jié)合活性。 將jurkat細胞在37℃，5％co2培養(yǎng)箱中在沒有（藍色）或1μm星形孢菌素（紅色）的情況下處理4-5小時，然后用rpe-膜聯(lián)蛋白v染色30分鐘。 使用facscalibur（becton dickinson）流式細胞儀使用fl2通道測量rpe-膜聯(lián)蛋白v的熒光強度。
關(guān)鍵詞：流式細胞儀 培養(yǎng)箱