中性和石灰性土壤*磷的測(cè)定——0.05mol·l-1nahco3法
5.3.3.1方法原理石灰性土壤由于大量游離碳酸鈣存在，不能用酸溶液來(lái)提有效磷。一般用碳酸鹽的堿溶液。由于碳酸根的同離子效應(yīng)，碳酸鹽的堿溶液降低碳酸鈣的溶解度，也就降低了溶液中鈣的濃度，這樣就有利于磷酸鈣鹽的提取。同時(shí)由于碳酸鹽的堿溶液，也降低了鋁和鐵離子的活性，有利于*和磷酸鐵的提取。此外，*堿溶液中存在著oh-、hco3-、co32-等陰離子，有利于吸附態(tài)磷的置換，因此nahco3不僅適用于石灰性土壤，也適應(yīng)于中性和酸性土壤中*磷的提取。待測(cè)液中的磷用鉬銻抗試劑顯色，進(jìn)行比色測(cè)定。
5.3.3.2主要儀器往復(fù)振蕩機(jī)、分光光度計(jì)或比色計(jì)。
5.3.3.3試劑
（1）0.05mol·l-1nahco3浸提液溶解nahco342.0g于800ml水中，以0.5mol·l-1naoh溶液調(diào)節(jié)浸提液的ph至8.5。此溶液曝于空氣中可因失去co2而使ph增高，可于液面加一層礦物油保存之。此溶液貯存于塑料瓶中比在玻璃中容易保存，若貯存超過(guò)1個(gè)月，應(yīng)檢查ph是否改變。
（2）無(wú)磷活性炭?；钚蕴砍：辛?，應(yīng)做空白試驗(yàn)，檢驗(yàn)有無(wú)磷存在。如含磷較多，須先用2mol·l-1hcl浸泡過(guò)夜，用蒸餾水沖冼多次后，再用0.05mol·l-1nahco3浸泡過(guò)夜，在平瓷漏斗上抽氣過(guò)濾，每次用少量蒸餾水淋洗多次，并檢查到無(wú)磷為止。如含磷較少，則直接用nahco3處理即可。
其他鉬銻抗試劑、磷標(biāo)準(zhǔn)溶液同5.2.2.3試劑中（6）、（7）。
5.3.3.4操作步驟稱取通過(guò)20目篩子的風(fēng)干土樣2.5g（**到0.001g）于150ml三角瓶（或大試管）中，加入0.05mol·l-1nahco3溶液50ml，再加一勺無(wú)磷活性炭（注1），塞緊瓶塞，在振蕩機(jī)上振蕩30min（注2），立即用無(wú)磷濾紙過(guò)濾，濾液承接于100ml三角瓶中，吸取濾液10ml（含磷量高時(shí)吸取2.5～5.0ml，同時(shí)應(yīng)補(bǔ)加0.05mol·l-1nahco3溶液至10ml）于150ml三角瓶中（注3），再用滴定管準(zhǔn)確加入蒸餾水35ml，然后移液管加入鉬銻抗試劑5ml（注4），搖勻，放置30min后，用880nm或700nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色。以空白液的吸收值為0，讀出待測(cè)液的吸收值（a）。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別準(zhǔn)確吸取5µg·ml-1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于150ml三角瓶中，再加入0.05mol·l-1nahco310ml，準(zhǔn)確加水使各瓶的總體積達(dá)到45ml，搖勻；*后加入鉬銻抗試劑5ml，混勻顯色。同待測(cè)液一樣進(jìn)行比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。*后溶液中磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5µg·ml-1p。
5.3.3.5結(jié)果計(jì)算
土壤中有效磷（p）含量（mg·kg-1）=
式中：：ρ——從工作曲線上查得磷的質(zhì)量濃度（µg·ml-1）；
m——風(fēng)干土質(zhì)量（g）；
v——顯色時(shí)溶液定容的體積（ml）；
103——將µg換算成的mg；
ts——為分取倍數(shù)；（即浸提液總體積與顯色對(duì)吸取浸提液體積之比）；
k——將風(fēng)干土換算成烘干土質(zhì)量的系數(shù)；
1000——換算成每kg含磷量。
表5-3土壤*磷分級(jí)
土壤*磷mg·kg-1p
等級(jí)
<5
低
5～10
中
>10
高
注釋
注1．活性炭對(duì)po43-有明顯的吸附作用，當(dāng)溶液中同時(shí)存在大量的hco3-離子飽和了活性炭顆粒表面，抑制了活性炭對(duì)po43-的吸附作用。
注2．本法浸提溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很大。有關(guān)資料曾用不同方式校正該法浸提溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，但這些方法都是在某些地區(qū)和某一條件下所得的結(jié)果，對(duì)于各地區(qū)不同土壤和條件下不能*適用，因此必須嚴(yán)格控制浸提時(shí)的溫度條件。一般要在室溫（20～25℃）下進(jìn)行，具體分析時(shí)，前后各批樣品應(yīng)在這個(gè)范圍內(nèi)選擇一個(gè)固定溫度以便對(duì)各批結(jié)果進(jìn)行相對(duì)比較。*好在恒溫振蕩機(jī)上進(jìn)行提取。顯色溫度（20℃左右）較易控制。
注3．由于取0.05mol·l-1nahco3浸提濾液10ml于50ml容量瓶中，加水和鉬銻抗試劑后，即產(chǎn)生大量的co2氣體，由于容量瓶口小，co2氣體不易逸出，在搖勻過(guò)程中，常造成試液外溢，造成測(cè)定誤差。為了克服這個(gè)缺點(diǎn)，可以準(zhǔn)確加入提取液、水和鉬銻抗試劑（共計(jì)50ml）于三角瓶中，混勻，顯色。
注4．全磷鉬銻抗法，其顯色溶液的酸的濃度為0.55mol·l-1(1/2h2so4)，鉬酸銨濃度為1g·l-1。在a.l.page,methodsofsoilanalysis.part2，1982（419～422頁(yè)）olsen法中先用h2so4中和nahco3提取液至ph5，再加鉬銻抗試劑使*后顯色溶液的酸的濃度為0.42mol·l-1(1/2h2so4)，鉬酸銨濃度為0.96g·l-1。經(jīng)試驗(yàn)，用本法測(cè)定磷的含量，其結(jié)果是很理想的。為了統(tǒng)一應(yīng)用全磷測(cè)定中的鉬銻抗試劑，同時(shí)考慮到olsen法是屬于例行方法，可以省去中和步驟，這樣*后顯色液酸的濃度約為0.45mol·l-1(1/2h2so4)，鉬酸銨濃度為1.0g·l-1，這樣仍在合適的顯色的酸的濃度范圍。
5.3.4酸性土壤*磷的測(cè)定方法a——0.03mol·l-1nh4f—0.025mol·l-1hcl
5.3.4.1方法原理nh4f—hcl法主要提取酸溶性磷和吸附磷，包括大部分磷酸鈣和一部分*和磷酸鐵。因?yàn)樵谒嵝匀芤褐蟹x子能與三價(jià)鋁離子和鐵離子形成絡(luò)合物，促使*和磷酸鐵的溶解：
3nh4f+3hf+alpo4→h3po4+(nh4)3alf6
3nh4f+3hf+fepo4→h3po4+(nh4)3fef6
溶液中磷與鉬酸銨作用生成磷鉬雜多酸，在一定酸度睛被sncl2還原成磷鉬藍(lán)，藍(lán)色深淺與磷的濃度成正比。
5.3.4.2試劑
（1）0.5mol·l-1鹽酸溶液。20.2ml濃鹽酸用蒸餾水稀釋至500ml。
（2）1mol·l-1氟化銨溶液。溶解nh4f37g于水中，稀釋至1l，貯存在塑料瓶中。
（3）浸提液。分別吸取1.0mol·l-1nh4f溶液15ml和0.5mol·l-1鹽酸溶液25ml，加入到460ml蒸餾水中，此即0.03mol·l-1nh4f—0.025mol·l-1hcl溶液。
（4）鉬酸銨試劑。溶解鉬酸銨(nh4)6moo24·4h2o15g于350ml蒸餾水中，徐徐加入10mol·l-1hcl350ml，并攪動(dòng)，冷卻后，加水稀釋至1l，貯于棕色瓶中。
（5）25g·l-1氯化亞錫甘油溶液。溶解sncl2·2h2o2.5g于10ml濃鹽酸中，待sncl2全部溶解溶液透明后，再加化學(xué)純甘油90ml，混勻，貯存于棕色瓶中（注1）。
（6）50µg·ml-1磷（p）標(biāo)準(zhǔn)溶液參照土壤全磷測(cè)定方法一。吸取50µg·ml-1磷溶液50ml于250ml容量瓶中，加水稀釋定容，即得10g·ml-1磷（p）標(biāo)準(zhǔn)溶液。
5.3.4.3操作步驟稱1.000g土樣，放入20ml度管中，從滴定管中加入浸提液7ml。試管加塞后，搖動(dòng)1min，用無(wú)磷干濾紙過(guò)濾。如果濾液不清，可將濾液倒回濾紙上再過(guò)濾，吸取濾液2ml（注2），加蒸餾水6ml和鉬酸銨試劑2ml，混勻后，加氯化亞錫甘油溶液1滴，再混勻。在5～15min內(nèi)（注3），在分光光度計(jì)上用700nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色（注4）。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別準(zhǔn)確吸取10g·ml-1磷（p）標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0和25.0ml，放入50ml容量瓶中，加水至刻度，配成0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0µg·ml-1磷（p）系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
分別吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各2ml，加水6ml和鉬試劑2ml，再加1滴氯化亞錫甘油溶液進(jìn)行顯色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
表5-4磷的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（nh4f—hcl法）
標(biāo)準(zhǔn)磷溶液
（µg·ml-1p）
吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液
（ml）
加水*
（ml）
鉬酸銨試劑
（ml）
*后溶液中磷的濃度
（µg·ml-1p）
0
0.5
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
2
2
2
2
2
2
2
6
6
6
6
6
6
6
2
2
2
2
2
2
2
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
*包括2ml提取液。
5.3.4.5結(jié)果計(jì)算
土壤*磷（p）含量（mg·kg-1）=
式中：ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得磷的質(zhì)量濃度（µg·ml-1）；
m——風(fēng)干土質(zhì)量（g）；
10——顯色時(shí)定容體積（ml）；
7——浸提劑的體積（ml）；
2——吸取濾液的體積（ml）；
103——將µg換算成的mg；
1000——換算成每kg含磷量。
表5-5土壤*磷分級(jí)
土壤*磷（mg·kg-1，p）
等級(jí)
<3
3～7
7～20
>20
很低
低
中等
高