pma是比較中肯的v-pcr染料，并已在數(shù)百份同行評審的論文和大量細(xì)菌、真菌和病毒菌株中得到驗(yàn)證。早期研究側(cè)重于細(xì)菌中的v-pcr，驗(yàn)證了在數(shù)十種不同細(xì)菌菌株中的程序，例如大腸桿菌、李斯特菌、軍團(tuán)菌、乳酸桿菌、結(jié)核分枝桿菌、衣原體、幽門螺桿菌以及許多其他與人類健康相關(guān)的菌株. v-pcr在細(xì)菌中的應(yīng)用非常廣泛，但也有許多引文在酵母和真菌、病毒以及各種其他細(xì)胞類型（如古生菌、變形蟲和寄生蟲）中使用v-pcr。
已驗(yàn)證的viability pcr應(yīng)用實(shí)例：
微生物組研究
環(huán)境測試
益生菌研究
臨床測試
食品和水衛(wèi)生
葡萄酒發(fā)酵
微生物測序
v-pcr的工作原理
pmaxx和pma是對dna具有高親和力的光活性染料。染料插入dsdna并在暴露于強(qiáng)烈可見光時(shí)形成共價(jià)鍵。該反應(yīng)通過在純化過程中去除修飾的dna和通過dna聚合酶抑制模板擴(kuò)增的組合來抑制修飾的dna模板的pcr擴(kuò)增。由于染料是細(xì)胞膜不可滲透的，當(dāng)用染料處理含有活細(xì)菌和死細(xì)菌的樣品時(shí)，只有細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌才容易受到dna修飾。在qpcr反應(yīng)中，死細(xì)胞dna將顯示出延遲擴(kuò)增和比活細(xì)胞更高的ct。
活性pcr染料，如pmaxx或pma是膜不滲透的，這使它們具有死細(xì)胞特異性。一旦進(jìn)入死細(xì)胞，它們就會(huì)與dna結(jié)合。暴露在強(qiáng)烈的可見光下會(huì)使染料具有活性，并使它們共價(jià)附著在dna上，這種dna修飾防止了隨后的pcr反應(yīng)中的擴(kuò)增。
v-pcr工作流程：
v-pcr的基本工作流程如下圖所示（詳細(xì)協(xié)議可在產(chǎn)品頁面上找到）。它適用于許多不同的樣本類型和實(shí)驗(yàn)設(shè)置。對于少量培養(yǎng)物，樣品可以在微型離心管中制備，并在pma-lite 2.0 led光解裝置中暴露在光下。
艾美捷viability pcr入門套件
可定制的viability pcr入門套件包含使用pma或pmaxx活力染料和qpcr選擇性檢測活細(xì)胞所需的材料。這些試劑盒可用于您選擇的任何細(xì)胞類型（有關(guān)已發(fā)布的經(jīng)過驗(yàn)證的細(xì)胞類型，請參閱pma/pmaxx參考列表和經(jīng)過驗(yàn)證的細(xì)菌菌株列表）。所有試劑盒均包含forget-me-not evagreenqpcr master mix，以及您選擇的pma或pmaxx染料。您還可以選擇帶有或不帶有革蘭氏陰性細(xì)菌增強(qiáng)劑（不適用于其他細(xì)胞類型）的試劑盒。用戶將需要提供自己的引物來擴(kuò)增他們感興趣的物種（請參閱此 博客文章 用于引物設(shè)計(jì)考慮）。每個(gè)試劑盒包含的試劑足以處理80種細(xì)菌培養(yǎng)物并進(jìn)行200次pcr反應(yīng)。
試劑盒包括：
pma染料或pmaxx染料
forget-me-not evagreen qpcr預(yù)混液
rox參考染料
pma增強(qiáng)劑（僅限革蘭氏陰性菌株）
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