材料與儀器
1、新鮮的組織
2、丙酮 蒸餾水 干冰 磷酸鹽緩沖液（pbs) tek oct 組織復(fù)合物
3、封閉容器 燒杯 恒冷裝置 解剖工具 平盤 組織模子 載玻片 刀片
步驟
一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液（pbs)tek oct 組織復(fù)合物（sakura finetekusa，torrance，ca)2. 特殊設(shè)備封閉容器燒杯恒冷裝置解剖工具平盤可以削去的一次性組織模子（pelco international，redding，ca)普通的無粘片劑的載玻片sakura 刀片（imeb，sanmarcos，ca)3. 細(xì)胞和組織新鮮的組織（見二、方法中的（2））二、方法1. 冷凍組織的準(zhǔn)備(1) 蓋上盛有包埋介質(zhì)的模子（推薦使用 tek o c t 組織復(fù)合物），準(zhǔn)備干冰-丙酮浴(在燒杯中簡(jiǎn)單混合干冰和丙酮）。(2) 處死動(dòng)物并取出目的組織與包埋介質(zhì)混合。(3) 放組織于冷模子底上。為了便于利用恒冷裝置，反向放目的切面于冷模子底上。(4) 將冷模子的底部放于干冰-丙酮浴的表面，這樣樣品將在 3~4 min 內(nèi)逐漸冷卻。當(dāng)品冷凍后將呈現(xiàn)白色。在冷凍時(shí)不要將模子掉入丙酮中。(5) 從模子中移去組織，放于-80°c 直到切片。如果組織樣品放置時(shí)間較長(zhǎng)，將其放盛有冷的蒸餾水的密封容器中以保持濕度。2. 切片及保存(1) 取冷凍的樣品置于含 o c t 復(fù)合物的低溫冷箱中，采用標(biāo)準(zhǔn)的冷凍組織切片法。(2) 讓樣品與冷箱中溫度（-25~-20°c) 平衡 15~20 min。如果樣品在切片時(shí)組織塊太冷，平衡時(shí)間可以適度延長(zhǎng)。(3) 將準(zhǔn)備用于 lcm 的切片（厚度 1~5um) 放于普通的無粘片劑的載破片上。如果組織粘于載玻片上太緊，可能不利于后續(xù)的 lcm 操作。(4) 放置好后，立即放到干冰上。如果當(dāng)天做 lcm，片子應(yīng)當(dāng)放在干冰上。否則，應(yīng)儲(chǔ)存于-80°c。
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