丘腦分泌素受體抗體(食欲素受體)的生wu素化標記實驗要點:
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/l碳suan氫鈉緩沖液或0.5mol/l硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的nhsb及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用nhsb量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時可加入去污劑如 triton x-100, tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生wu素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生wu素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生wu素會對生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導(dǎo)致高本底。
9.產(chǎn)品僅用于科研,詳見說明。
小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1a(mouse sdf-1a)
小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1r(mouse sdf-1r)
小鼠可溶性e-選擇素(mouse se-selectin/scd62e)
小鼠可溶性l-選擇素(mouse sl-selectin/scd62l)
小鼠可溶性p-選擇素(mouse sp-selectin/scd62p)
小鼠p物質(zhì)(mouse substance p)
小鼠催乳素(mouse prl)
小鼠孕酮(mouse prog)
小鼠睪酮(mouse testo)
小鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(mouse tarc)
小鼠組織因子(mouse tf)
小鼠組織因子抑制物(mouse tfpi)
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β1(mouse tgf-β1)
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β2(mouse tgf-β2)
小鼠可溶性粒細胞靶受體(mouse strem-1)
小鼠端粒酶(mouse telomerase)
小鼠toll樣受體-2(mouse tlr-2)
小鼠toll樣受體-4(mouse tlr-4)
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(mouse timp-1)
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(mouse timp-2)
小鼠腫瘤壞死因子-a(mouse tnf-a)
小鼠腫瘤壞死因子-b(mouse tnf-b)
小鼠腫瘤壞死因子-r(mouse tnf-r)