扇貝毒素-2crm-ptx2-b標(biāo)準(zhǔn)品是一種經(jīng)認(rèn)證的校正液，用于分析方法的開發(fā)和ptx 2的準(zhǔn)確定量。crm-ptx2-b的濃度使其適合于制備液相色譜(lc)和液相色譜-質(zhì)譜(lc-ms)儀器校準(zhǔn)的稀釋液系列，也適用于貝類對照樣品的回收實(shí)驗(yàn)。
扇貝毒素-2crm-ptx2-b標(biāo)準(zhǔn)品是新西蘭cawthron研究所從浮游植物水華中分離到的一種植物。2001年2月初，這些浮游植物在離新西蘭布勒灣海岸3-4公里的地方被凈化，并按照前面的描述[2]進(jìn)行了一系列色譜步驟的凈化。用純化的ptx 2在cds0h(~4mm)中溶解制得原液。然后用定量nmr[5]測定了該原液中ptx 2的濃度，然后將ptx 2原液準(zhǔn)確地稀釋在經(jīng)氣處理的高純甲醇中，制成終容為2 l的ptx 2原液。該溶液與teflon攪拌棒和磁混合器混合，在氬氣條件下冷卻于冰浴中。阿利古特被分配到琥珀玻璃安瓿和火焰密封在argonle下，然后被標(biāo)記，包裝，并立即轉(zhuǎn)移到長期儲存在-80℃。每個(gè)安瓿含有大約0.5毫升的溶液。
扇貝毒素, 特別是 扇貝毒素-2, 主要由海洋甲藻中的 鰭藻屬 (dinophysis spp.) 產(chǎn) 生 , 如倒卵形鰭藻 (dinophysis fortii)、漸尖鰭藻(d. acuminata)、尖銳鰭 藻(d. acuta)、具尾鰭藻(d. caudata)、勇士鰭藻(d. miles)等 (suzuki et al, 2009; reguera et al, 2012; nielsen et al, 2013; tong et al, 2015)。但由于鰭藻的混 合營養(yǎng)特性, 即鰭藻的生長和繁殖需要三級食物鏈 [ 鰭藻—紅色中縊蟲 (mesodinium rubrum) —隱藻 (geminigera cryophila)]來完成(park et al, 2006), 這 為從大規(guī)模培養(yǎng)的鰭藻中提取 扇貝毒素-2帶來一定的困 難。因此, 國際上一般是通過大量收集濃縮野外海水 樣品或染毒貝類來獲取 ptx2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備原料。這樣 的工藝不僅制備過程復(fù)雜且工序繁瑣, 更重要的是原 料來源極不穩(wěn)定, 無法滿足常規(guī)監(jiān)管及應(yīng)急需要。
因 此, 有研究以上述三級食物鏈為實(shí)驗(yàn)手段 (gao et al, 2017), 成功大規(guī)模培養(yǎng)了來自中國大連海 域的漸尖鰭藻(days01-e6 株), 為制備 扇貝毒素-2提供了 充足的原料。并在此基礎(chǔ)上, 重點(diǎn)研究了在純種鰭藻 細(xì)胞中提取、分離、hplc 純化扇貝毒素-2的標(biāo)準(zhǔn)化方法, 同時(shí)采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(hplc-ms/ms)進(jìn) 行定量檢測, 為建立高效快速的 ptx2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制 方法奠定基礎(chǔ)。
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