液相色譜儀建立等度洗脫方法的主要步驟如下：
1選擇基本色譜條件：
色譜柱：15mm×4.6mm或25mm×4.6mm，c8或c18反相填料，5μm粒度。
流動相：水-乙腈（5~99%）b可變。
梯度時間為：25min（2ml/min）到50min（1ml/min）。
2調(diào)整梯度范圍
盡可能減少分離開始和結(jié)束時的時間浪費(fèi)（沒有色譜峰只走基線。
3調(diào)整分離度
如果色譜圖有很多峰分離度不好，可以延長tg，要延長天g可以增加柱長，減小填料的顆粒度，降低流動相速度。調(diào)節(jié)tg、流動相速度和柱尺寸來保持平均容量因子值。
4調(diào)節(jié)峰容量
調(diào)節(jié)到色譜圖中能容納所有的峰，改變流速以便使峰與峰的距離合適
5如果要進(jìn)一步改變峰間距，就改變有機(jī)溶劑的成分。
6如果樣品的相對分子質(zhì)量大于500，就按s比例增加tg。s可按下面數(shù)據(jù)進(jìn)行估計：
樣品相對分子質(zhì)量
s
樣品相對分子質(zhì)量
s
100
1000
4
10
10000
100000
30
100
關(guān)鍵詞：液相色譜儀 色譜柱