今日喆圖小編教大家如何提取質(zhì)粒dna的實驗，相關(guān)設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、真空干燥箱
實驗方法原理
堿裂解法是基于dna的變性與復(fù)性差異而達到分離目的的。堿性使質(zhì)粒dna變性，再將ph值調(diào)至中性使其復(fù)性，復(fù)性的為質(zhì)粒dna，而染色體dna不會復(fù)性，纏結(jié)成網(wǎng)狀物質(zhì)，通過離心除去。
實驗材料
大腸桿菌
試劑、試劑盒 tris-hcledta葡萄糖naohkaacnaac異丙醇*酚:cl仿無水乙醇lb培養(yǎng)基
儀器、耗材 超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、搖床、恒溫水浴鍋、臺式離心機取液器、低溫冰箱冷凍、真空干燥機、電泳儀水平電泳槽、紫外觀測儀
實驗步驟 一、材料與試劑準備
1. 材料：大腸桿菌。
2. 儀器：超凈工作臺，恒溫培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺式離心機，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測儀。
3. 試劑：（1）solution i ：25 mm tris-hcl（ph7.4），10 mm edta（ph8.0），50 mm葡萄糖，高壓滅菌，4℃保存。（2）solution ii ：0.2 m naoh， 1%sds 現(xiàn)配現(xiàn)用。（3）solution iii ：5 n kac ph4.8，高壓滅菌，4℃保存。（4）3 m naac ph5.2，高壓滅菌，
4℃保存。（5）異丙醇，*（8 mg/ml），酚/cl仿，無水乙醇，70%乙醇，lb培養(yǎng)基，電泳試劑。
二、操作步驟
1. 細菌繁殖：lb培養(yǎng)基，2 ml/20 ml，37℃，200 rpm，搖一搖，過夜。
2. 離心10 min，5 000 rpm， 4℃；棄上淸液。
3. 沉淀（菌體細胞）預(yù)冷的tes緩沖液洗滌，離心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入預(yù)冷的1 ml solution i，冰浴10 min。
4. 重新懸浮，加入150 ul*母液，室溫放置5 min。
5. 加入1.2 ml solution ii， 冰浴5 min。
6. 加入0.9 ml預(yù)冷乙酸鉀，混勻，離心10 min，12 000 rpm，4℃。
7. 加入1.5 ml異丙醇，-20℃冰箱內(nèi)放置15 min。
8. 離心10 min，12 000 rpm，4℃。
9. 取沉淀，懸于400 ul te緩沖液中。
10. 加入40 ul，3 m naac。
11. 酚/cl仿，抽提，乙醇沉淀。
12. 離心10 min，12 000 rpm，4℃。
13. 取沉淀，冷凍干燥，再懸浮于50 ul te緩沖液中。
14. 電泳檢測提取dna的質(zhì)量。
恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、真空干燥箱等實驗設(shè)備，詳情可咨詢上海喆圖編。