細胞：rpasmc細胞
中文名稱：鼠肺動脈平滑肌細胞
生長特性：貼壁細胞
來源：sciencell細胞庫
培養(yǎng)基：dmem-h培養(yǎng)基 血清：10%fbs（gibco胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% fbs、10% dmso
rpasmc細胞傳代：
1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，pbs緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25%yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。
2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3）：取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）：注意培養(yǎng)基ph值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
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腺苷對博萊霉所致肺纖維化以及脾與骨髓等基質(zhì)細胞實驗：
目的應用雙哌達莫(dpm)、腺苷(ado)與ado拮抗劑(th)治療(ble)肺纖維化小鼠,觀察肺、脾等病理變化,探討肺纖維化發(fā)病機理.
方法:
實驗第1天100只小鼠經(jīng)氣管注入ble 8.5 mg*kg-1,隨機分ble、dpm、ado和th四組；
第2天起分別給予ns(100μl*d-1)、dpm、ado和th,劑量均為50mg*kg-1*d-1,共7天；
第4～30天內(nèi)chu死動物,組織化學法觀察肺內(nèi)纖維變化與脾、胸腺、骨髓病理學改變.
結(jié)果:
ble組和th組第4～6天脾、胸腺髓質(zhì)與骨髓中許多基質(zhì)細胞huai死導致組織嚴重疏松。
ble組第20天后脾與胸腺逐漸weisuo,肺與脾內(nèi)網(wǎng)狀纖維大量增加。
dpm組與ado組第4～6天脾、骨髓壞死基質(zhì)細胞較少,第30天肺未發(fā)生纖維化,淋巴器官未weisuo.
結(jié)論:
ble能致脾、骨髓等基質(zhì)細胞大量huai死與嚴重組織疏松.內(nèi)、外源性ado能輕度減少基質(zhì)細胞huai死,促進淋巴組織與造血組織增生,抑制ble誘導的肺纖維化與淋巴器官weisuo.
關鍵詞：培養(yǎng)箱