dna定量是dna樣品制備過程中的一項重要工作，helixyte 綠色雙鏈dna定量檢測試劑盒提供了一種用helixyte green br快速測定dsdna的方法。該測定法在三個數(shù)量級上是線性的，并且比紫外線吸收度讀數(shù)靈敏度高幾個數(shù)量級。helixyte green-br與dsdna結(jié)合后熒光增強，序列依賴性小，可準確測定基因組dna、病毒dna、miniprep-dna或pcr擴增產(chǎn)物等多種來源的dna樣品。該方法對rna上的雙鏈dna（dsdna）具有高度的選擇性，并且被優(yōu)化以測量從10 pg/ul到10 ng/ul的dna濃度。
適用儀器
熒光酶標儀
ex:490 nm
em：530 nm
cutoff：510 nm
推薦孔板:純黑色孔板
實驗方案
樣品實驗方案
簡要概述
1.準備dsdna標準品，測試樣品和染料工作溶液
2.添加dna標準液或測試樣品（50 ul）
3.添加helixyte green-br工作溶液（50 ul）
4.在室溫下孵育2分鐘
5.檢測ex / em = 490/530 nm的熒光強度
提示：操作前將所有組件加熱到室溫。暫時沒有關(guān)于helixyte green dsdna染色劑的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑，應(yīng)謹慎處理。dmso儲備溶液應(yīng)特別小心，因為已知dmso有助于有機分子進入組織。
溶液配制
標準溶液配制
將100 ul的100 ug / ml dsdna標準溶液（組分c）添加到400 ul的測定緩沖液（組分b）中，以生成20 ug / ml的dsdna標準溶液。然后用測定緩沖液（組分b）進行1：3的系列稀釋，以得到0至20 ug / ml的系列稀釋的dsdna標準品。
工作溶液配制
helixyte green br工作溶液：將50 ul helixyte green br（組分a）添加到5 ml的測定緩沖液（組分b）中，使總體積為5.050 ml。通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo工作溶液免受光照。注意：我們建議在塑料容器中而不是玻璃中制備該溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。為了獲得結(jié)果，應(yīng)在準備后的幾個小時內(nèi)使用此溶液。
實驗步驟
表1.在透明底部96孔微孔板中的dsdna標準品和測試樣品的布局。ds = dsdna標準品（ds1-ds7，20至0.027 ug / ml）;bl =空白對照；ts =測試樣品
bl
bl
ts
ts
ds1
ds1
…
…
ds2
ds2
…
…
ds3
ds3
ds4
ds4
ds5
ds5
ds6
ds6
ds7
ds7
表2.每個孔的試劑組成
well
volume
reagent
ds1-ds7
50 ul
連續(xù)稀釋 (20 to 0.027 ug/ml)
bl
50 ul
緩沖液 (component b)
ts
50 ul
實驗樣品
1.根據(jù)表1和表2提供的布局，制備dsdna標準品（ds）、空白對照品（bl）和測試樣品（ts）。對于384孔板，每孔使用25 ul試劑，而不是50 ul。注：根據(jù)需要處理細胞或組織樣本。
2.添加50 ul helixyte green-br染料工作液（2x）分別加入dsdna標準液、空白對照液和供試品中，使總分析體積為100ul/孔。對于384孔板，添加25 ul的helixyte green-br染料工作溶液，每孔總體積為50 ul/孔。
3.在室溫下避光培養(yǎng)2分鐘。
4.在ex/em=490/530 nm（截止=515nm）處用熒光酶標儀檢測熒光強度。
圖示
圖1.用helixyte green dsdna定量試劑盒在96孔黑色孔板中測量了dsdna劑量反應(yīng)。
關(guān)鍵詞：熒光酶標儀 酶標儀