中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
ny/t 1725-2009
蔬菜中滅蠅胺殘留量的測定高效液相色譜法
determination of cyromazine residue in vegetables by hplc
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了新鮮蔬菜中滅蠅胺殘留量的高效液相色譜測定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于黃瓜、番茄、菜豆、甘藍(lán)、大白菜、芹菜、蘿卜等蔬菜中滅蠅胺殘留量的測定。
本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限為0.02mg/kg。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
gb/ t 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
3原理
試樣（中的滅蠅胺經(jīng)乙酸銨-乙腈混合溶液提取強(qiáng)陽離子交換萃取柱凈化后，用高效液相色譜儀進(jìn)行分離，在215nm處六元環(huán)上的π電子被激發(fā)，用紫外檢測器檢測。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。
4試劑和材料
除非另有說明，在分析中僅使用分析純試劑和gb/t 6682中規(guī)定的至少二級的水。
4.1乙腈（ch3cn）：色譜純。
4.2甲醇（ch3oh）：色譜純。
4.3乙酸銨溶液[c(ch3coonh4)=0.05 mol/ l]：稱取7.70 g乙酸銨（ch3coonh4），用水溶解后轉(zhuǎn)移至2l容量瓶中，用水定容至刻度。
4.4乙酸銨-乙腈溶液（1 +4）：最取200 ml乙酸銨溶液（4.3）至1l容量瓶中，用乙腈（4.1）定容至刻度。
4.5鹽酸溶液[c(hci) =0.1 mol/l]：吸取8.5 ml鹽酸（hcl）至1 l容量瓶中，用水定容至刻度。
4.6氨水-甲醇溶液（5+95）：吸取5 ml氨水（nh3·h2o）至100 ml容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度。
4.7乙腈-水溶液（97 +3）：吸取3 ml水至100 ml容量瓶中，用乙腈（4.1）定容至刻度。
4.8滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥95%。
4.9滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取0.01 g（精確至0. 000 1 g）滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈（4. 1）溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，再用乙腈（4.1）定容至刻度，得到質(zhì)量濃度約為1 000 mg/ l的滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液。貯于-20℃~-16℃冰柜中備用。
4.10滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用乙腈（4.1）稀釋滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.9），得到質(zhì)量濃度為1.0 mg/l和0.2mg/l的滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
4.11強(qiáng)陽離子交換萃取柱（scx）：以硅膠為基質(zhì)，鍵合有苯磺酸官能團(tuán)，規(guī)格為500 mg/6 ml。
5儀器
5.1高效液相色譜儀，配有紫外檢測器。
5.2分析天平，感量0.1 mg和0.01 g。
5.3食品加工器。
5.4均質(zhì)器，6 000 r/min~36 000 r/min。
5.5具塞比色管，100 ml。
5.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.7氮吹裝置。
6試樣制備
取蔬菜樣品可食部分，用干凈紗布輕輕擦去樣本表面的附著物，采用對角線分割法，取對角部分，將其切碎，充分混勻，用四分法取樣或直接放入食品加工器中加工成勻漿。勻漿試樣放入聚乙烯瓶中，于-20℃~-16℃條件下保存。稱取試樣時(shí)，常溫試樣應(yīng)攪拌均勻；冷凍試樣應(yīng)先解凍再混勻。
7分析步驟
7.1提取與濃縮
稱取試樣20g（精確至0.01g）于150ml燒杯中，加入50ml乙酸銨-乙腈溶液（4.4），高速均質(zhì)2min。均質(zhì)液經(jīng)鋪有濾紙的布氏漏斗抽濾至100ml具塞比色管中，再用約30ml乙酸銨-乙腈溶液（4.4）沖洗燒杯和均質(zhì)器刀頭，均質(zhì)30s左右，洗液一并濾入上述100 ml具塞比色管中，并用乙酸銨乙腈溶液（4.4）定容。蓋上塞子，將濾液混合均勻。
用移液管準(zhǔn)確吸取10ml提取液至150ml圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上（水浴溫度40℃）濃縮至只含水的溶液（冷凝裝置無液滴滴下），加入鹽酸溶液（4.5）約2 ml，待凈化。
7.2凈化
依次用甲醇（4.2）、水各5ml預(yù)淋活化強(qiáng)陽離子交換萃取柱（4.11），當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即將7.1所得溶液轉(zhuǎn)移至scx柱中。用3ml鹽酸溶液（4.5）將圓底燒瓶中的殘余物洗入scx柱中，并重復(fù)一次。然后依次用水、甲醇（4.2）各5 ml淋洗scx柱，棄去所有流出液并將小柱抽干。
用15ml氨水-甲醇溶液（4.6）分3次洗脫scx柱，收集洗脫液于150 ml圓底燒瓶中。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上（水浴溫度40℃）濃縮至近干，氮?dú)獯蹈珊笥?.00 ml乙腈-水溶液（4.7）溶解蒸殘物，過0.45μm微孔有機(jī)濾膜，待測。
7.3色譜參考條件
7.3.1色譜柱：nh2不銹鋼柱，250 mm×4.6 mm，5μm；或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。
7.3.2流動相：乙腈-水溶液（97+3）。
7.3.3流速：1.0 ml/min。
7.3.4進(jìn)樣體積：10μl。
7.3.5檢測波長：215 nm。
7.3.6柱溫：35℃。
7.4測定
分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以待測液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。
7.5空白試驗(yàn)
除不加試樣外，均按上述分析步驟進(jìn)行操作。
8結(jié)果計(jì)算
試料中滅蠅胺含量用質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式計(jì)算：
式中：
ρs——標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/l）；
vs——標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積，單位為微升（μl）；
v0——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（ml）；
vx——待測液進(jìn)樣體積，單位為微升（μl）；
as——標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；
ax——待測液的峰面積；
m——試料質(zhì)量，單位為克（g）；
f——提取液體積/分取體積；
計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
9精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的15%。
在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的30%。
10色譜圖
滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。