human il-17 elisa kit
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心elisa法。用抗人il-17抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中
的人il-17會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入*化的抗人il-17抗體和辣根過
氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷薸l-17抗體與結(jié)合在包被抗體上的人il-17結(jié)合、*與親和素特
異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(tmb)，tmb在辣根過氧化物酶
的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測od值，il-17濃度與od450
值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中il-17的濃度。
human il-17elisa kit
樣品收集:
1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集
血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2. 血漿：抗凝劑推薦使用edta-na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可
檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的pbs (0.01m, ph=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會
影響測量結(jié)果)，稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的pbs(一般按1:9的重量體
積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9ml的pbs，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。
推薦在pbs中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組
織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，
取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。
5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
human il-17elisa kit
6. 樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測，請按一次使用量分裝，凍
存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(6個月內(nèi)檢測)，避免反復(fù)凍融。
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品高值，請根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先
做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。
human il-17elisa kit
試驗(yàn)所需自備物品:
1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，ep管及一次性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)
晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超
過50℃，使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，
靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻(濃度為2000pg/ml)。
然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃
度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/ml，標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空
白孔0pg/ml。如配制1000pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml2000pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml標(biāo)
準(zhǔn)品&樣品稀釋液的ep管中，混勻即可，其余濃度依此類推。
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4. *化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μl/孔計(jì))，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配
制100-200μl。使用前15分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作
濃度。當(dāng)日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μl/孔計(jì))，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制
100-200μl。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮hrp酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當(dāng)日使用。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例：(以500μl/管為例，也可根據(jù)實(shí)際用量來稀釋，如200μl/管)